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DON无毒phage-ELISA检测方法的建立及展青霉素免疫学检测初探

目录第1-7页
本研究的创新之处第7-8页
中文摘要第8-10页
ABSTRACT第10-13页
缩略语(Abbreviations)第13-15页
第一部分 DON无毒phage-ELISA检测方法的建立第15-99页
 1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇文献综述第15-35页
   ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇的发现第15页
   ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇的理化性质第15-18页
   ·谷物及其制品DON的污染情况第18-19页
   ·DON的毒性和作用机理第19-25页
     ·DON的急性毒性第20页
     ·DON的吸收及代谢第20-21页
     ·DON的免疫毒性第21-24页
     ·DON的细胞毒性效应第24-25页
     ·DON的生殖毒性第25页
   ·DON的提取、纯化与检测第25-32页
     ·DON的提取技术第26页
     ·DON的净化技术第26-28页
     ·DON的检测技术第28-32页
   ·DON的防控第32-33页
   ·选题目的和意义第33-35页
 2 材料与方法第35-66页
   ·试剂与仪器第35-39页
   ·实验方法和步骤第39-66页
     ·MBSA(Modified Bovine Serum Albumen)的制备第39页
     ·DON免疫抗原(DON-MBSA)的制备第39-40页
     ·DON检测抗原(DON-HG-OVA)的制备第40-42页
     ·抗DON多克隆抗体的制备第42-43页
     ·抗DON单克隆抗体的制备第43-49页
     ·抗DON单克隆抗体特性的鉴定第49-52页
     ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫吸附检测方法的建立第52-54页
     ·DON单克隆抗体免疫亲和层析柱的研制第54-57页
     ·DON噬菌体七肽模似表位的淘选及应用第57-63页
     ·DON无毒间接竞争ELISA检测方法的建立第63-66页
 3 结果第66-88页
   ·DON人工抗原的制备及免疫效果第66-69页
     ·DON—HG的制备(封闭、接臂、解封闭)第66-67页
     ·DON—HG与载体蛋白的偶联(3-HG-DON-OVA的制备)第67-68页
     ·DON免疫抗原(DON-MBSA)的制备及免疫BALB/c小鼠第68-69页
   ·抗DON单克隆抗体的制备第69-70页
     ·细胞融合第69页
     ·杂交瘤细胞的筛选第69页
     ·抗DON单克隆抗体的生产和纯化第69-70页
   ·抗DON单克隆抗体的鉴定第70-73页
     ·杂交瘤细胞的染色体分析第70-71页
     ·抗DON单克隆抗体的类别和亚类鉴定第71页
     ·杂交瘤细胞12D1分泌抗体的稳定性第71页
     ·单克隆抗体亲和力常数的测定第71-72页
     ·抗DON单克隆抗体特异性测定结果第72-73页
   ·DON间接竞争ELISA检测方法的建立第73-78页
     ·DON间接竞争ELISA标准曲线第73-74页
     ·甲醇浓度对ELISA的影响第74页
     ·不同提取液对DON回收的影响第74-75页
     ·小麦、玉米样品DON加标回收检测结果第75页
     ·间接竞争ELISA法与进口ELISA试剂盒检测样品DON结果第75-76页
     ·自建的ELISA检测饲料样品中DON结果第76-78页
   ·DON免疫亲和层析柱的研制第78-81页
     ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇醇HPLC检测方法的建立第78-79页
     ·免疫亲和柱使用条件第79页
     ·DON免疫亲和柱洗脱液的选择第79页
     ·DON免疫亲和柱性能评价第79-81页
     ·免疫亲和柱-HPLC法检测小麦、玉米和饲料中DON含量第81页
   ·DON噬菌体七肽模似表位的淘选及应用第81-88页
     ·大肠杆菌E. coli ER2738生长曲线的测定第81-82页
     ·亲和淘选结果第82-83页
     ·噬菌体阳性克隆的鉴定第83-84页
     ·阳性噬菌体竞争抑制曲线第84-85页
     ·DON无毒ELISA检测方法(phage-ELISA)的建立及应用第85-88页
 4 讨论第88-98页
   ·DON人工抗原的制备第88-92页
     ·载体蛋白的选择第88-89页
     ·小分子偶联基团的选择第89页
     ·偶联方法的选择第89-91页
     ·DON羟基保护第91页
     ·DON检测抗原的制各第91-92页
   ·抗DON单克隆抗体的制备第92-94页
   ·DON的免疫检测第94-95页
   ·DON七肽模似表位的淘选第95-98页
 5 小结第98-99页
第二部分 展青霉素免疫以检测初探第99-143页
 6 展青霉素文献综述第99-105页
   ·展青霉素理化性质第99页
   ·展青霉素的主要产生菌第99-100页
   ·食品中展青霉素的污染情况第100页
   ·展青霉素的毒性第100-102页
     ·急性和亚急性毒性第100页
     ·致癌性第100-101页
     ·致畸、致突变作用第101页
     ·对免疫系统的影响第101-102页
   ·展青霉素的检测第102-104页
     ·薄层色谱法(TLC)第102页
     ·气相色谱法(GC)第102-103页
     ·高效液相色谱法(HPLC)第103页
     ·免疫学检测方法第103-104页
   ·展青霉毒素的防控第104-105页
 7 材料与方法第105-112页
   ·主要实验材料第105-106页
   ·实验方法和步骤第106-112页
     ·展青霉素人工抗原(PAT-HG-OVA)的制备第106-107页
     ·展青霉素人工抗原PAT-MBSA的制备第107-108页
     ·抗展青霉素多克隆抗体的制各第108-109页
     ·抗展青霉素单克隆抗体的研究第109-110页
     ·展青霉素结构类似物的合成第110-112页
 8 结果第112-122页
   ·展青霉素活化结果第112-113页
   ·PAT-HG与载体蛋白的偶联第113页
   ·抗展青霉素多克隆抗体的制备第113-114页
   ·抗展青霉素单克隆抗体的研究第114页
   ·展青霉素结构类似物的合成结果第114-120页
     ·化合物B(4-羟基-4H-5,6-二氢-苯并呋喃)的合成第114页
     ·化合物C(2-羧亚甲基-3-羟基-环己酮)的合成第114-117页
     ·化合物D(2-甲酯亚甲基3-3-羟基-环己酮)的合成第117-118页
     ·展青霉素结构类似物(4-羟基-4H-5,6-二氢-苯并呋喃(3,2C)-2-酮)的合成第118-120页
   ·展青霉素结构类似物稳定性结果第120-122页
 9 讨论第122-127页
   ·展青霉素人工抗原及多克隆抗体的制备第122-124页
   ·展青霉素结构类似物的合成第124-127页
 10 小结第127-128页
 11 参考文献第128-142页
 12 致谢第142-143页
 个人简厉第143页
 13 博士研究生期间撰写的学术论文第143页

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