| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第10-20页 |
| 1.1 副溶血性弧菌 | 第10-11页 |
| 1.1.1 副溶血性弧菌的概况 | 第10页 |
| 1.1.2 副溶血性弧菌的危害 | 第10-11页 |
| 1.2 副溶血性弧菌的致病毒素 | 第11-13页 |
| 1.2.1 不耐热的溶血素（TLH） | 第11-12页 |
| 1.2.2 耐热直接溶血毒素（TDH） | 第12页 |
| 1.2.3 相对耐热溶血毒素（TRH） | 第12页 |
| 1.2.4 尿素酶 | 第12-13页 |
| 1.3 副溶血性弧菌检测方法的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.3.1 分子生物学检测 | 第13-16页 |
| 1.3.1.1 核酸杂交技术 | 第13-14页 |
| 1.3.1.2 PCR检测技术 | 第14-16页 |
| 1.3.1.2.1 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR） | 第14页 |
| 1.3.1.2.2 荧光定量PCR方法（Real-Time PCR） | 第14-15页 |
| 1.3.1.2.3 环介导等温扩增方法（LAMP） | 第15-16页 |
| 1.3.2 免疫学检测方法 | 第16-17页 |
| 1.3.2.1 酶联免疫吸附方法（ELISA） | 第16页 |
| 1.3.2.2 免疫荧光抗体方法（Indirect immunofluorescence） | 第16页 |
| 1.3.2.3 免疫胶体金方法（Dot—immunogold filtration assay，DIGFA） | 第16-17页 |
| 1.3.3 基因芯片检测方法 | 第17-18页 |
| 1.4 PCR-ELISA方法检测副溶血性弧菌的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4.1 PCR-ELISA方法简介 | 第18页 |
| 1.4.2 PCR-ELISA方法的应用 | 第18页 |
| 1.4.3 PCR-ELISA方法检测副溶血性弧菌的意义 | 第18-20页 |
| 第二章 副溶血性弧菌PCR-ELISA检测方法的建立 | 第20-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要培养基和溶液的配置 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 菌种的活化 | 第22-23页 |
| 2.2.2 副溶血性弧菌基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 菌液计数 | 第23页 |
| 2.2.2.2 菌液DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2.3 模板DNA的检测 | 第24页 |
| 2.2.3 toxR基因和tdh基因特异性引物的设计 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 引物的设计 | 第24页 |
| 2.2.3.2 引物特异性的验证 | 第24-25页 |
| 2.2.4 PCR扩增条件的选择 | 第25页 |
| 2.2.5 酶标板的包被 | 第25-26页 |
| 2.2.6 PCR-ELISA检测方法的检出限确定 | 第26-27页 |
| 2.2.6.1 PCR产物的获得 | 第26页 |
| 2.2.6.2 ELISA检测 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-33页 |
| 2.3.1 副溶血性弧菌基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.3.2 特异性引物的验证 | 第28-29页 |
| 2.3.2.1 设计的特异性引物 | 第28页 |
| 2.3.2.2 引物特异性的验证结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 退火温度的实验结果 | 第29页 |
| 2.3.4 酶标板包被液浓度确定的结果 | 第29-30页 |
| 2.3.5 PCR-ELISA方法检测副溶血性弧菌的检出限 | 第30-33页 |
| 第三章 PCR-ELISA方法准确度的验证 | 第33-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第33页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第33-34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 PCR-ELISA方法检测样品的流程 | 第34页 |
| 3.2.2 国标方法（GB 4789.7-2013）检测样品的流程 | 第34-37页 |
| 3.2.3 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及样品检测 | 第37页 |
| 3.2.3.1 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立 | 第37页 |
| 3.2.3.1.1 DNA模板的制备 | 第37页 |
| 3.2.3.1.2 引物的设计及特异性验证 | 第37页 |
| 3.2.3.1.3 荧光定量PCR反应体系及反应条件 | 第37页 |
| 3.2.3.1.4 荧光定量PCR方法的检出限 | 第37页 |
| 3.2.3.2 用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测样品 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.3.1 样品的检测结果比较 | 第37-39页 |
| 3.3.2 国标方法检测结果 | 第39页 |
| 3.3.3 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的检测结果 | 第39-42页 |
| 3.3.3.1 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的检出限 | 第39-41页 |
| 3.3.3.2 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对样品的检测结果 | 第41-42页 |
| 3.3.4 3种方法检测结果的比较 | 第42-43页 |
| 第四章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
