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糖基转移酶高拷贝链霉菌构建及发酵过程优化研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 绪论第11-24页
    1.1 井冈霉素概述第11页
    1.2 井冈霉素的合成途径研究第11-18页
    1.3 糖基转移酶第18-21页
        1.3.1 糖基转移酶的作用机制第18-19页
        1.3.2 糖基转移酶的应用第19-20页
        1.3.3 井冈霉素生物合成中糖基转移酶的研究第20-21页
    1.4 井冈霉素的高效表达策略第21-23页
        1.4.1 外源基因表达系统第21页
        1.4.2 启动子第21-22页
        1.4.3 基因拷贝数第22页
        1.4.4 发酵参数优化第22-23页
    1.5 研究意义和内容第23-24页
        1.5.1 研究意义第23页
        1.5.2 研究内容第23-24页
第二章 糖基转移酶质粒构建第24-39页
    2.1 引言第24页
    2.2 实验材料第24-28页
        2.2.1 菌株和载体第24页
        2.2.2 实验试剂及仪器第24-27页
        2.2.3 培养基配制第27页
        2.2.4 相关溶液配制第27-28页
    2.3 实验方法第28-31页
        2.3.1 吸水链霉菌基因组DNA的小量提取第28-29页
        2.3.2 碱裂解法提取大肠杆菌质粒第29页
        2.3.3 PCR扩增目的基因第29页
        2.3.4 DNA片段回收第29-30页
        2.3.5 TA克隆第30页
        2.3.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第30-31页
        2.3.7 重组质粒pMD-19-valG的筛选第31页
        2.3.8 重组质粒pIJ8630-valG的构建第31页
        2.3.9 菌落PCR第31页
    2.4 结果讨论第31-37页
        2.4.1 PCR扩增目的基因第31-33页
        2.4.2 TA克隆第33-35页
        2.4.3 重组质粒pIJ8630-valG的验证第35-37页
    2.5 小结第37-39页
第三章 糖基转移酶高拷贝链霉菌构建第39-48页
    3.1 引言第39页
    3.2 实验材料第39-43页
        3.2.1 菌株第39-40页
        3.2.2 实验试剂及仪器第40-42页
        3.2.3 培养基配制第42页
        3.2.4 相关溶液配制第42-43页
    3.3 实验方法第43-45页
        3.3.1 大肠杆菌质粒DNA的提取第43-44页
        3.3.2 质粒从大肠杆菌到吸水链霉菌的接合转移第44页
        3.3.3 吸水链霉菌感受态细胞的制备第44页
        3.3.4 质粒DNA转化吸水链霉菌感受态细胞第44-45页
        3.3.5 吸水链霉菌感受态细胞电转化第45页
    3.4 实验结果第45-47页
        3.4.1 接合转移第45-46页
        3.4.2 质粒DNA转化吸水链霉菌感受态细胞第46页
        3.4.3 重组菌的井冈霉素A产量检测第46-47页
    3.5 小结第47-48页
第四章 糖基转移酶发酵条件摇瓶培养的研究第48-67页
    4.1 引言第48页
    4.2 实验材料第48-51页
        4.2.1 菌株第48页
        4.2.2 实验试剂及仪器第48-50页
        4.2.3 培养基第50-51页
    4.3 实验方法第51-54页
        4.3.1 种子培养第51页
        4.3.2 重组吸水链霉菌摇瓶发酵第51页
        4.3.3 菌体生物量的测定第51页
        4.3.4 发酵液中井冈霉素A产量的测定第51-52页
        4.3.5 Plackett-Burman试验第52-53页
        4.3.6 响应曲面第53-54页
    4.4 实验结果第54-65页
        4.4.1 井冈霉素A标准曲线的测定第54-55页
        4.4.2 Plackett-Burman设计筛选重要因素第55-59页
        4.4.3 运用Design-Expert设计实验第59-64页
        4.4.4 重组吸水链霉菌发酵优化条件的验证第64-65页
    4.5 小结第65-67页
第五章 总结和展望第67-69页
    5.1 本论文的主要结论第67-68页
    5.2 展望第68-69页
参考文献第69-74页
致谢第74-75页
攻读学位期间发表的学术论文目录第75页

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