| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 井冈霉素概述 | 第11页 |
| 1.2 井冈霉素的合成途径研究 | 第11-18页 |
| 1.3 糖基转移酶 | 第18-21页 |
| 1.3.1 糖基转移酶的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3.2 糖基转移酶的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 井冈霉素生物合成中糖基转移酶的研究 | 第20-21页 |
| 1.4 井冈霉素的高效表达策略 | 第21-23页 |
| 1.4.1 外源基因表达系统 | 第21页 |
| 1.4.2 启动子 | 第21-22页 |
| 1.4.3 基因拷贝数 | 第22页 |
| 1.4.4 发酵参数优化 | 第22-23页 |
| 1.5 研究意义和内容 | 第23-24页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 糖基转移酶质粒构建 | 第24-39页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.2.1 菌株和载体 | 第24页 |
| 2.2.2 实验试剂及仪器 | 第24-27页 |
| 2.2.3 培养基配制 | 第27页 |
| 2.2.4 相关溶液配制 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.3.1 吸水链霉菌基因组DNA的小量提取 | 第28-29页 |
| 2.3.2 碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第29页 |
| 2.3.3 PCR扩增目的基因 | 第29页 |
| 2.3.4 DNA片段回收 | 第29-30页 |
| 2.3.5 TA克隆 | 第30页 |
| 2.3.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| 2.3.7 重组质粒pMD-19-valG的筛选 | 第31页 |
| 2.3.8 重组质粒pIJ8630-valG的构建 | 第31页 |
| 2.3.9 菌落PCR | 第31页 |
| 2.4 结果讨论 | 第31-37页 |
| 2.4.1 PCR扩增目的基因 | 第31-33页 |
| 2.4.2 TA克隆 | 第33-35页 |
| 2.4.3 重组质粒pIJ8630-valG的验证 | 第35-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-39页 |
| 第三章 糖基转移酶高拷贝链霉菌构建 | 第39-48页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-43页 |
| 3.2.1 菌株 | 第39-40页 |
| 3.2.2 实验试剂及仪器 | 第40-42页 |
| 3.2.3 培养基配制 | 第42页 |
| 3.2.4 相关溶液配制 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.3.1 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第43-44页 |
| 3.3.2 质粒从大肠杆菌到吸水链霉菌的接合转移 | 第44页 |
| 3.3.3 吸水链霉菌感受态细胞的制备 | 第44页 |
| 3.3.4 质粒DNA转化吸水链霉菌感受态细胞 | 第44-45页 |
| 3.3.5 吸水链霉菌感受态细胞电转化 | 第45页 |
| 3.4 实验结果 | 第45-47页 |
| 3.4.1 接合转移 | 第45-46页 |
| 3.4.2 质粒DNA转化吸水链霉菌感受态细胞 | 第46页 |
| 3.4.3 重组菌的井冈霉素A产量检测 | 第46-47页 |
| 3.5 小结 | 第47-48页 |
| 第四章 糖基转移酶发酵条件摇瓶培养的研究 | 第48-67页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 实验材料 | 第48-51页 |
| 4.2.1 菌株 | 第48页 |
| 4.2.2 实验试剂及仪器 | 第48-50页 |
| 4.2.3 培养基 | 第50-51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.3.1 种子培养 | 第51页 |
| 4.3.2 重组吸水链霉菌摇瓶发酵 | 第51页 |
| 4.3.3 菌体生物量的测定 | 第51页 |
| 4.3.4 发酵液中井冈霉素A产量的测定 | 第51-52页 |
| 4.3.5 Plackett-Burman试验 | 第52-53页 |
| 4.3.6 响应曲面 | 第53-54页 |
| 4.4 实验结果 | 第54-65页 |
| 4.4.1 井冈霉素A标准曲线的测定 | 第54-55页 |
| 4.4.2 Plackett-Burman设计筛选重要因素 | 第55-59页 |
| 4.4.3 运用Design-Expert设计实验 | 第59-64页 |
| 4.4.4 重组吸水链霉菌发酵优化条件的验证 | 第64-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-67页 |
| 第五章 总结和展望 | 第67-69页 |
| 5.1 本论文的主要结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
