| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第11-16页 |
| 1.1 多粘菌素概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 多粘菌素理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 多粘菌素的生物合成机制 | 第11-12页 |
| 1.1.3 多粘菌素的作用机制 | 第12页 |
| 1.1.4 多粘菌素的药理作用 | 第12-13页 |
| 1.2 多粘类芽孢杆菌 | 第13页 |
| 1.3 响应面法 | 第13页 |
| 1.4 多粘菌素发酵条件优化 | 第13-14页 |
| 1.5 多粘菌素的检测方法 | 第14-15页 |
| 1.5.1 管碟法 | 第14-15页 |
| 1.5.2 HPLC检测方法 | 第15页 |
| 1.6 本文研究内容 | 第15-16页 |
| 2 ectB基因对多粘菌素产量的影响 | 第16-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 实验主要仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第17页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第17页 |
| 2.1.5 培养基 | 第17-18页 |
| 2.1.6 常用溶液及缓冲液 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 重组pMD516-ectB质粒的构建 | 第18-20页 |
| 2.2.2 重组pMD516-ectB质粒电转化到P.polymyxa 1-8 菌株 | 第20-22页 |
| 2.2.3 ectB基因对P.polymyxa 1-8 菌株产多粘菌素的影响 | 第22-24页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第24-28页 |
| 2.3.1 重组质粒pMD516-ectB构建 | 第24-27页 |
| 2.3.2 工程菌株P.polymyxa 1-8/pMD516-ectB及 菌株P.polymyxa1-8/pMD516的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 ectB基因对P.polymyxa 1-8 菌株产多粘菌素的影响 | 第28页 |
| 2.4 小结 | 第28-30页 |
| 3 响应面法优化发酵培养基 | 第30-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.1 菌种 | 第30页 |
| 3.1.2 实验主要仪器 | 第30页 |
| 3.1.3 试剂 | 第30页 |
| 3.1.4 培养基 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 单因素实验设计 | 第30页 |
| 3.2.2 Plackett-Burman实验设计 | 第30-31页 |
| 3.2.3 最陡爬坡试验设计 | 第31页 |
| 3.2.4 响应面法 | 第31页 |
| 3.2.5 管碟法测多粘菌素效价 | 第31-32页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第32-44页 |
| 3.3.1 单因子实验 | 第32-36页 |
| 3.3.2 Placket-Burman实验 | 第36-38页 |
| 3.3.3 最徒爬坡实验 | 第38页 |
| 3.3.4 响应面法优化发酵培养基 | 第38-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-45页 |
| 4 P.polymyxa 1-8 发酵产多粘菌素条件优化 | 第45-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 菌种 | 第45页 |
| 4.1.2 实验主要仪器 | 第45-46页 |
| 4.1.3 试剂 | 第46页 |
| 4.1.4 培养基 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 摇瓶发酵方法 | 第46页 |
| 4.2.2 发酵罐应用 | 第46-47页 |
| 4.2.3 还原糖的测定 | 第47页 |
| 4.2.4 细胞干重的测定 | 第47页 |
| 4.2.5 淀粉的水解 | 第47-48页 |
| 4.2.6 管碟法测多粘菌素效价 | 第48页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第48-59页 |
| 4.3.1 发酵过程pH优化 | 第48-49页 |
| 4.3.2 种子液接种量优化 | 第49-50页 |
| 4.3.3 发酵液溶解氧供应量优化 | 第50页 |
| 4.3.4 多粘菌素积累阶段环境温度优化 | 第50-51页 |
| 4.3.5 在 5 L发酵罐上试用不同发酵参数调控策略 | 第51-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 5 结论与展望 | 第60-63页 |
| 5.1 本研究的主要结论 | 第60-61页 |
| 5.2 本研究的创新之处 | 第61页 |
| 5.3 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录A | 第68-69页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第69页 |
