| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| ·Mpr1 介绍 | 第9-11页 |
| ·Mpr1 | 第9页 |
| ·Mpr1 抗氧化胁迫功能 | 第9-11页 |
| ·P. pastoris表达系统 | 第11-13页 |
| ·P. pastoris表达系统 | 第11-12页 |
| ·P. pastoris发酵优化策略 | 第12-13页 |
| ·黑曲霉 α-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第13-14页 |
| ·立题依据及意义 | 第14页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第16-27页 |
| ·菌种与质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·细胞培养 | 第17-18页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·培养方法 | 第17-18页 |
| ·分子生物学操作 | 第18-23页 |
| ·P. pastoris GS115 基因组的提取 | 第18页 |
| ·PCR扩增MPR1 基因 | 第18-19页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第19-20页 |
| ·制备E. coli热激转化感受态细胞 | 第20页 |
| ·热激转化E. coli感受态细胞 | 第20页 |
| ·重组质粒pQE30-MPR1 的构建 | 第20-21页 |
| ·热激转化E. coli感受态细胞 | 第21页 |
| ·重组质粒pQE30-MPR1 的筛选与鉴定 | 第21页 |
| ·重组E. coli JM109/pQE30-MPR1 的构建与筛选 | 第21页 |
| ·重组E. coli JM109/pQE30-MPR1 的培养和诱导表达 | 第21页 |
| ·重组质粒pPICZA-MPR1 的构建 | 第21页 |
| ·热激转化E. coli感受态细胞 | 第21页 |
| ·重组质粒pPICZA-MPR1 的筛选与鉴定 | 第21-22页 |
| ·P. pastoris KM71/pPIC9K-αglu感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·重组P. pastoris KM71/pPIC9K-αglu/pPICZA-MPR1 的构建与筛选 | 第22-23页 |
| ·重组酵母的培养和诱导表达 | 第23页 |
| ·分析方法 | 第23-27页 |
| ·P. pastoris细胞光密度测定 | 第23页 |
| ·P. pastoris细胞干重测定 | 第23页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第23页 |
| ·N-乙酰转移酶Mpr1 酶活测定 | 第23-24页 |
| ·α-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第24页 |
| ·细胞死活和ROS含量测定 | 第24页 |
| ·响应面优化实验 | 第24-25页 |
| ·重组Mpr1 的纯化 | 第25页 |
| ·重组Mpr1 的最适反应pH和pH稳定性分析 | 第25页 |
| ·重组Mpr1 的最适反应温度和温度稳定性分析 | 第25页 |
| ·金属离子、化学添加剂对重组Mpr1 影响分析 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-54页 |
| ·P. pastoris MPR1 基因在大肠杆菌中的克隆表达及酶学性质研究 | 第27-36页 |
| ·P. pastoris MPR1 基因在大肠杆菌中的克隆表达 | 第27-30页 |
| ·重组E. coli JM109/pQE30-MPR1 的摇瓶优化 | 第30-32页 |
| ·重组Mpr1 酶学性质初步研究 | 第32-36页 |
| ·共表达Mpr1 对重组菌株P. pastoris KM71/pPIC9K-αglu/pPICZA-MPR1 生长和表达的影响 | 第36-47页 |
| ·PCR扩增MPR1 基因以及重组表达载体pPICZA-MPR1 的构建 | 第36-37页 |
| ·重组P. pastoris KM71/pPIC9K-αglu/pPICZA-MPR1 的构建和筛选 | 第37-38页 |
| ·重组P. pastoris的表达验证 | 第38-39页 |
| ·共表达Mpr1 对发酵过程中酵母死亡率的影响 | 第39-42页 |
| ·共表达Mpr1 对 3.6 L罐发酵过程中细胞产酶及 α-葡萄糖苷酶稳定性的影响 | 第42-47页 |
| ·重组菌株P. pastoris KM71/pPIC9K-αglu/pPICZA-MPR1 的 3.6 L罐发酵过程优化 | 第47-54页 |
| ·不同的溶氧浓度对重组菌株产 α-葡萄糖苷酶产量的影响 | 第47-49页 |
| ·不同诱导温度对重组菌产 α-葡萄糖苷酶的影响 | 第49-51页 |
| ·不同甲醇诱导浓度对重组菌产酶的影响 | 第51-54页 |
| 第四章 主要结论与展望 | 第54-56页 |
| 主要结论 | 第54-55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第62页 |
