| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| ·莽草酸的理化性质及药理功能 | 第10-11页 |
| ·莽草酸的物理化学性质 | 第10页 |
| ·莽草酸的药理功能 | 第10-11页 |
| ·莽草酸的生产方法 | 第11-13页 |
| ·从植物中提取 | 第11-12页 |
| ·化学合成 | 第12页 |
| ·微生物发酵 | 第12-13页 |
| ·莽草酸途径 | 第13-15页 |
| ·国内外研究进展 | 第15-16页 |
| ·本课题的研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 敲除 E.coli W3110 的 aroL 基因 | 第17-28页 |
| ·引言 | 第17页 |
| ·Red 同源重组 | 第17-18页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-25页 |
| ·菌体培养及质粒提取 | 第19-20页 |
| ·同源线性片段的克隆 | 第20-22页 |
| ·E.coli W3110-pKD46 的构建 | 第22-23页 |
| ·同源重组 | 第23-24页 |
| ·抗性基因消除 | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-27页 |
| ·同源线性片段的克隆 | 第25-26页 |
| ·同源重组 PCR 验证结果 | 第26页 |
| ·抗性基因消除 PCR 验证结果 | 第26-27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 第三章 重组质粒 pKFG、pFGT 的构建 | 第28-49页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-44页 |
| ·E.coliW3110 基因组 DNA 的提取 | 第30页 |
| ·质粒 pMD19-aroF 的构建 | 第30-33页 |
| ·质粒 pMD19-aroG 的构建 | 第33-35页 |
| ·质粒 pMD19-aroF-aroG 的构建 | 第35-38页 |
| ·质粒 pKFG 的构建 | 第38-41页 |
| ·质粒 pFGT 的构建 | 第41-44页 |
| ·实验结果 | 第44-48页 |
| ·pMD19-aroF 与 pMD19-aroG 的构建 | 第44-45页 |
| ·质粒 PMD-aroF-aroG 的构建 | 第45-46页 |
| ·质粒 pKFG 的构建 | 第46-47页 |
| ·质粒 pFGT 的构建 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 重组质粒 pAEB、pEBP 的构建 | 第49-77页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-69页 |
| ·质粒 pMD19-aroE 的构建 | 第49-51页 |
| ·质粒 pMD19-aroB 的构建 | 第51-52页 |
| ·质粒 pMD19-aroE-aroB 的构建 | 第52-55页 |
| ·质粒 pCEB 的构建 | 第55-58页 |
| ·质粒 pAEB 的构建 | 第58-61页 |
| ·质粒 pEBP 的构建 | 第61-69页 |
| ·实验结果 | 第69-76页 |
| ·pMD19-aroE 与 pMD19-aroB 的构建 | 第69-70页 |
| ·质粒 pMD19-aroE-aroB 的构建 | 第70-71页 |
| ·质粒 pCEB 的构建 | 第71页 |
| ·质粒 PAEB 的构建 | 第71-72页 |
| ·质粒 pMD19-ppS 的构建 | 第72-73页 |
| ·重组质粒 pEBP 的构建 | 第73-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第五章 发酵菌株构建及发酵研究 | 第77-96页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·实验材料 | 第77页 |
| ·分析方法 | 第77-79页 |
| ·莽草酸标准曲线 | 第77-79页 |
| ·样品处理 | 第79页 |
| ·E.coliW3110:aroL-与 E.coliGSH:aroL-,aroK-莽草酸产量的对比 | 第79页 |
| ·发酵菌株的构建及莽草酸高产菌株的筛选 | 第79-82页 |
| ·E.coliGSH:aroL-,aroK-感受态的制备 | 第79-80页 |
| ·质粒 pKFG 、pFGT 的转化 | 第80-81页 |
| ·E.coliGSH: pKFG、E.coliGSH:pFGT 感受态的制备 | 第81页 |
| ·质粒 pAEB 、pEBP 的转化 | 第81页 |
| ·莽草酸高产菌株的筛选 | 第81-82页 |
| ·响应面分析法优化培养基 | 第82-91页 |
| ·单因素实验 | 第82-87页 |
| ·响应面实验 | 第87-91页 |
| ·验证实验 | 第91页 |
| ·发酵罐发酵 | 第91-94页 |
| ·发酵培养基 | 第91页 |
| ·种子液培养 | 第91-92页 |
| ·条件控制 | 第92页 |
| ·结果分析 | 第92-94页 |
| ·本章小结 | 第94-96页 |
| 第六章 结论与建议 | 第96-98页 |
| ·结论 | 第96页 |
| ·建议 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-102页 |
| 附录 | 第102-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者和导师简介 | 第107-108页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第108-109页 |
