| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 血管紧张素转换酶与高血压 | 第13-14页 |
| 1.2 乳源性ACE抑制肽研究现状 | 第14-15页 |
| 1.3 ACE抑制肽的制备及分离纯化方法 | 第15-19页 |
| 1.3.1 ACE抑制肽制备方法 | 第15-16页 |
| 1.3.1.1 微生物发酵法 | 第15页 |
| 1.3.1.2 酶解法 | 第15-16页 |
| 1.3.2 分离纯化研究进展 | 第16-19页 |
| 1.3.2.1 超滤膜分离 | 第16页 |
| 1.3.2.2 大孔吸附树脂 | 第16-17页 |
| 1.3.2.3 凝胶层析 | 第17页 |
| 1.3.2.4 反相高效液相色谱 | 第17-19页 |
| 1.4 降血压肽的分析鉴定 | 第19-20页 |
| 1.5 ACE抑制肽结构及功能的研究现状 | 第20页 |
| 1.6 立题意义及研究内容 | 第20-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 试验材料与试剂 | 第23页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 酶解脱脂乳技术路线与试验方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第24页 |
| 2.2.2 酶制剂的筛选 | 第24页 |
| 2.2.3 最佳酶配比的确定 | 第24-25页 |
| 2.2.4 复合酶解脱脂乳制备ACE抑制肽工艺优化 | 第25页 |
| 2.2.5 超滤分离脱脂乳酶解物 | 第25页 |
| 2.2.6 大孔树脂DA201-C脱盐 | 第25-26页 |
| 2.2.7 凝胶色谱Sephadex G-25和Sephadex G-15分离纯化 | 第26页 |
| 2.2.8 RP-HPLC分析ACE抑制肽的组成 | 第26页 |
| 2.3 分析测定方法 | 第26-28页 |
| 2.3.1 pH-Stat法测蛋白质水解度 | 第26-27页 |
| 2.3.2 ACE抑制活性的测定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 半抑制浓度IC50的测定 | 第28页 |
| 2.3.4 双缩脲法测定多肽含量 | 第28页 |
| 2.3.5 氨基酸组成及序列鉴定 | 第28页 |
| 2.4 数据处理 | 第28-29页 |
| 3 结果与讨论 | 第29-78页 |
| 3.1 酶解脱脂乳制备ACE抑制肽适宜酶制剂的确定 | 第29-31页 |
| 3.2 混料试验设计优化复合蛋白酶的组成 | 第31-39页 |
| 3.2.1 复合酶配比对脱脂牛乳水解度影响结果分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2 复合酶配比对脱脂牛乳制备ACE抑制肽活性的影响分析 | 第34-36页 |
| 3.2.3 酶解脱脂牛乳复合蛋白酶的最佳配比 | 第36页 |
| 3.2.4 复合蛋白酶配比对脱脂羊乳水解度影响分析 | 第36-37页 |
| 3.2.5 复合酶配比对水解脱脂羊乳制备ACE抑制肽活性的影响 | 第37-39页 |
| 3.2.6 酶解脱脂羊乳复合蛋白酶的最佳配比确定 | 第39页 |
| 3.3 单因素试验优化复合酶解脱脂乳制备ACE抑制肽工艺 | 第39-45页 |
| 3.3.1 温度影响复合蛋白酶水解脱脂乳制备ACE抑制肽的效果 | 第39-40页 |
| 3.3.2 pH对复合酶解脱脂乳产ACE抑制肽的效果分析 | 第40-42页 |
| 3.3.3 水解时间影响ACE抑制活性和水解度变化分析 | 第42-43页 |
| 3.3.4 酶添加量对ACE抑制活性和水解度影响分析 | 第43-45页 |
| 3.4 响应面优化复合酶解脱脂乳制备ACE抑制肽工艺条件 | 第45-59页 |
| 3.4.1 Box-Behnken设计优化脱脂牛乳复合酶解工艺 | 第45-52页 |
| 3.4.1.1 双酶水解脱脂牛乳效果的响应面分析 | 第45-48页 |
| 3.4.1.2 响应面优化酶解工艺对ACE抑制率的变化分析 | 第48-51页 |
| 3.4.1.3 响应面试验设计验证 | 第51-52页 |
| 3.4.2 响应面优化复合酶水解脱脂羊乳工艺 | 第52-59页 |
| 3.4.2.1 复合酶解脱脂羊乳水解度的响应面分析 | 第52-55页 |
| 3.4.2.2 三酶水解脱脂羊乳制备ACE抑制肽条件的优化分析 | 第55-58页 |
| 3.4.2.3 响应面优化脱脂羊乳复合酶解工艺的验证 | 第58-59页 |
| 3.5 ACE抑制肽分离纯化 | 第59-66页 |
| 3.5.1 多肽标准曲线 | 第59页 |
| 3.5.2 脱脂乳酶解液超滤 | 第59-61页 |
| 3.5.3 大孔树脂DA201-C脱盐精制 | 第61-62页 |
| 3.5.3.1 大孔树脂DA201-C静态吸附曲线 | 第61页 |
| 3.5.3.2 树脂对ACE抑制肽的动态解析曲线 | 第61-62页 |
| 3.5.4 凝胶色谱Sephadex G-25分离纯化ACE抑制肽 | 第62-63页 |
| 3.5.5 凝胶色谱Sephadex G-15分离纯化ACE抑制肽 | 第63-64页 |
| 3.5.6 反相高效液相色谱法分析ACE抑制肽 | 第64-66页 |
| 3.6 酶法制备ACE抑制肽的结构鉴定 | 第66-78页 |
| 3.6.1 氨基酸组成分析 | 第66-67页 |
| 3.6.2 ACE抑制肽分子量分布 | 第67-70页 |
| 3.6.3 ACE抑制肽结构鉴定 | 第70-78页 |
| 4 结论、创新点及展望 | 第78-80页 |
| 4.1 结论 | 第78-79页 |
| 4.2 创新点 | 第79页 |
| 4.3 展望 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表的成果 | 第89-90页 |
