| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·纤维素乙醇的研究背景 | 第12-13页 |
| ·纤维素乙醇的研究概况 | 第13-16页 |
| ·国外纤维素乙醇的研究及应用 | 第13-14页 |
| ·国内纤维素乙醇的研究及应用 | 第14-16页 |
| ·纤维素乙醇生产工艺 | 第16-22页 |
| ·纤维素原料的预处理工艺 | 第16-18页 |
| ·纤维素原料的水解糖化 | 第18-20页 |
| ·纤维素发酵生产乙醇工艺 | 第20-22页 |
| ·乙醇的浓缩回收 | 第22页 |
| ·纤维素水解发酵产乙醇应用中的瓶颈 | 第22-23页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 绿色木霉三类纤维素酶基因在工业酿酒酵母AS 2.489中的共表达 | 第24-40页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-32页 |
| ·大肠杆菌小量质粒提取 | 第25-26页 |
| ·bgl1基因内NheI酶切位点的消除 | 第26-27页 |
| ·bgl1基因的T-vector克隆 | 第27页 |
| ·快速小量制备大肠杆菌感受态及连接产物的转化 | 第27-28页 |
| ·快速菌落PCR鉴定阳性重组子 | 第28页 |
| ·DNA测序和序列分析 | 第28-29页 |
| ·胶回收DNA片段 | 第29页 |
| ·bgl1基因重组表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·酶切片段的去磷酸化 | 第30页 |
| ·eg3、cbh2和bgl1三基因共表达载体的构建 | 第30页 |
| ·酿酒酵母的电穿孔转化法 | 第30-31页 |
| ·刚果红染色 | 第31页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第31-32页 |
| ·重组酿酒酵母的高抗筛选 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·bgl1基因引物设计 | 第32页 |
| ·bgl1基因内酶切位点的消除 | 第32-33页 |
| ·bgl1基因的克隆及鉴定 | 第33-34页 |
| ·bgl1基因重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·eg3、cbh2和bg1三基因共表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·纤维素酶基因的转化 | 第37页 |
| ·刚果红染色 | 第37-38页 |
| ·pScIKP-ecb转化株的PCR验证 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 重组酿酒酵母酶活性检测 | 第40-51页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-45页 |
| ·酵母生物量的测定 | 第41页 |
| ·菌体生长曲线的测定 | 第41页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第41-42页 |
| ·滤纸酶活力(FPA)的测定方法 | 第42页 |
| ·羧甲基纤维素酶活力(CMCA)的测定方法 | 第42-43页 |
| ·pNP标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| ·pNPC测定纤维素酶系中CBHⅡ的活性 | 第44页 |
| ·pNPG测定纤维素酶系中BGLⅠ的活性 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·酵母生物量的测定 | 第45页 |
| ·重组酿酒酵母时间生长曲线 | 第45-46页 |
| ·重组酵母ecb3000的综合酶活性 | 第46-47页 |
| ·重组酵母ecb3000的CBH Ⅱ活性 | 第47-48页 |
| ·重组酵母ecb3000的BGL Ⅰ活性 | 第48页 |
| ·重组酵母ecb3000的EGⅢ活性 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 重组酿酒酵母ecb3000的摇瓶培养、发酵条件的建立 | 第51-58页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·酵母细胞数及生长状态的检测 | 第51-52页 |
| ·酵母生物量的检测 | 第52页 |
| ·重组酵母生长培养基正交 | 第52页 |
| ·酒母培养基氮源配方优化 | 第52页 |
| ·重组酵母发酵培养基的优化 | 第52-53页 |
| ·发酵液的蒸馏 | 第53页 |
| ·发酵液还原糖浓度的测定 | 第53页 |
| ·重铬酸钾法测定发酵液中乙醇浓度 | 第53页 |
| ·气相色谱测定发酵液中乙醇浓度 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-56页 |
| ·重组酵母生长培养基正交 | 第54页 |
| ·酒母培养基氮源配方优化 | 第54-55页 |
| ·重组酵母发酵培养基的优化 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 重组酿酒酵母ecb3000的发酵罐培养、发酵条件的建立 | 第58-65页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-61页 |
| ·发酵工艺流程 | 第59页 |
| ·酵母细胞数及生长状态的检测 | 第59页 |
| ·发酵液中还原糖的测定 | 第59页 |
| ·发酵液中乙醇的测定 | 第59页 |
| ·发酵液总酸测定 | 第59-60页 |
| ·发酵液挥发酸的测定(以乙酸计) | 第60-61页 |
| ·发酵液有效酸度的测定 | 第61页 |
| ·发酵率与真正发酵力的测定 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·5L发酵罐实验中还原糖同步检测结果 | 第61-62页 |
| ·5L发酵罐实验中乙醇同步检测结果 | 第62-63页 |
| ·5L发酵罐实验中酸度同步检测结果 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 全文总结与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 缩略语 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
