| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 ε-聚赖氨酸的研究进展 | 第11-18页 |
| 1.1.1 ε-聚赖氨酸的理化性质 | 第11页 |
| 1.1.2 ε-聚赖氨酸的抑菌机制 | 第11页 |
| 1.1.3 ε-聚赖氨酸的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.4 ε-聚赖氨酸产生菌的筛选 | 第12-13页 |
| 1.1.5 ε-聚赖氨酸高产菌育种 | 第13-15页 |
| 1.1.6 ε-聚赖氨酸发酵生产 | 第15-17页 |
| 1.1.7 ε-聚赖氨酸聚合度的控制 | 第17页 |
| 1.1.8 ε-聚赖氨酸合成机制 | 第17-18页 |
| 1.2 核糖体工程育种 | 第18-22页 |
| 1.2.1 核糖体工程概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 链霉素抗性突变 | 第20页 |
| 1.2.3 庆大霉素抗性突变 | 第20-21页 |
| 1.2.4 利福霉素抗性突变 | 第21页 |
| 1.2.5 其它抗生素抗性突变 | 第21-22页 |
| 1.3 本论文的研究内容 | 第22-24页 |
| 1.3.1 立题依据及研究意义 | 第22页 |
| 1.3.2 本论文主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 复合诱变选育链霉素抗性ε-PL高产菌 | 第24-38页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 微生物菌种 | 第24页 |
| 2.2.2 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.3 诱变剂量的确定 | 第25-26页 |
| 2.2.4 抗生素最小抑菌浓度(MIC)的确定 | 第26页 |
| 2.2.5 小白链霉菌复合诱变筛选流程 | 第26-27页 |
| 2.2.6 摇瓶发酵 | 第27页 |
| 2.2.7 限制性片段长度多态性分析 | 第27-29页 |
| 2.2.8 分析方法 | 第29-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-37页 |
| 2.3.1 UV诱变剂量 | 第31页 |
| 2.3.2 EMS诱变剂量 | 第31-32页 |
| 2.3.3 ARTP诱变剂量 | 第32页 |
| 2.3.4 三种方法的诱变效果评估 | 第32-33页 |
| 2.3.5 不同抗生素抗性对菌株产量的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.6 “ARTP+EMS”复合诱变选育链霉素抗性ε-PL高产菌株 | 第34-35页 |
| 2.3.7 高产菌株的形态特征 | 第35-36页 |
| 2.3.8 “复合诱变+Strr”育种对链霉菌基因多态性的影响 | 第36-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 基因组重排与核糖体工程选育多重抗性ε-PL产生菌 | 第38-47页 |
| 3.1 前言 | 第38-39页 |
| 3.2 材料与方法 | 第39-42页 |
| 3.2.1 微生物菌种 | 第39页 |
| 3.2.2 培养基、培养条件和相关溶液的配制 | 第39页 |
| 3.2.3 摇瓶发酵 | 第39页 |
| 3.2.4 链霉素、庆大霉素、利福霉素MIC的测定 | 第39页 |
| 3.2.5 ARTP诱变制备庆大霉素抗性（Genr）突变菌株库 | 第39-40页 |
| 3.2.6 “基因组重排+庆大霉素抗性(Genr)”选育双重抗性ε-PL高产菌 | 第40-41页 |
| 3.2.7 核糖体工程选育三重抗性ε-PL高产菌株 | 第41页 |
| 3.2.8 限制性片段长度多态性分析 | 第41-42页 |
| 3.2.9 分析方法 | 第42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-46页 |
| 3.3.1 ARTP诱变筛选Genr突变株 | 第42页 |
| 3.3.2 基因组重排结合核糖体工程选育双抗ε-PL高产菌 | 第42-45页 |
| 3.3.3 核糖体工程构建三抗ε-PL高产菌 | 第45页 |
| 3.3.4 GSGR-1菌株稳定性 | 第45-46页 |
| 3.4 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 突变菌高产ε-PL的生理生化机制初探 | 第47-64页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 材料与方法 | 第47-53页 |
| 4.2.1 微生物菌种 | 第47页 |
| 4.2.2 培养基 | 第47页 |
| 4.2.3 培养条件 | 第47-48页 |
| 4.2.4 ε-PL聚合度 | 第48页 |
| 4.2.5 扫描电镜观察孢子和胞内菌丝形态 | 第48-49页 |
| 4.2.6 突变位点的分析 | 第49页 |
| 4.2.7 酶活测定 | 第49-51页 |
| 4.2.8 RT-PCR比较四株菌关键酶活转录水平差异 | 第51-52页 |
| 4.2.9 细胞活力染色和CTC染色 | 第52页 |
| 4.2.10 分析方法 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第53-63页 |
| 4.3.1 突变株生理形态、培养特征的变化 | 第53-54页 |
| 4.3.2 ε-PL摇瓶产量和抗性突变位点的差异 | 第54-57页 |
| 4.3.3 ε-PL聚合度 | 第57页 |
| 4.3.4 G67与GSGR-1菌丝活力的差异 | 第57-58页 |
| 4.3.5 恒定pH和酸性pH冲击策略下补料-分批发酵过程差异 | 第58-60页 |
| 4.3.6 抗性突变株关键酶活性的变化 | 第60-62页 |
| 4.3.7 突变株的转录水平差异 | 第62-63页 |
| 4.4 小结 | 第63-64页 |
| 第五章 S.albulusM-Z18与Streptomycessp.GSG-1全基因组序列分析及ε-PL合成代谢途径对比 | 第64-80页 |
| 5.1 前言 | 第64页 |
| 5.2 材料与方法 | 第64-67页 |
| 5.2.1 菌株 | 第64页 |
| 5.2.2 培养基 | 第64页 |
| 5.2.3 培养条件 | 第64页 |
| 5.2.4 链霉菌全基因组样品制备 | 第64-65页 |
| 5.2.5 全基因组测序流程 | 第65页 |
| 5.2.6 生物信息分析流程 | 第65-66页 |
| 5.2.7 基因预测和功能注释 | 第66-67页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第67-78页 |
| 5.3.1 M-Z18和GSG-1大片段DNA的提取 | 第67页 |
| 5.3.2 全基因组测序结果 | 第67-68页 |
| 5.3.3 基因预测和功能注释 | 第68-73页 |
| 5.3.4 Strr与Genr对GSG-1核糖体蛋白的影响 | 第73-74页 |
| 5.3.5 基于?-PL合成代谢图谱的高产机制阐述 | 第74-78页 |
| 5.3.6 GSG-1的高产机制的补充验证 | 第78页 |
| 5.4 小结 | 第78-80页 |
| 第六章 PS-PAD策略促进突变株GSGR-1大量合成ε-PL | 第80-97页 |
| 6.1 前言 | 第80-81页 |
| 6.2 材料与方法 | 第81-83页 |
| 6.2.1 微生物菌种 | 第81页 |
| 6.2.2 培养基 | 第81页 |
| 6.2.3 培养条件 | 第81-82页 |
| 6.2.4 细胞活力染色和CTC染色 | 第82页 |
| 6.2.5 平均比合成速率计算 | 第82页 |
| 6.2.6 胞内代谢物质分析 | 第82-83页 |
| 6.2.7 酶活测定 | 第83页 |
| 6.2.8 分析方法 | 第83页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第83-96页 |
| 6.3.1 GSGR-1发酵生产ε-PL的最适pH值探究 | 第83-84页 |
| 6.3.2 pH调控溶氧工艺(pHasistedDOcontrolstrategy,PAD)的建立 | 第84-85页 |
| 6.3.3 建立适配GSGR-1的酸性pH冲击策略 | 第85-88页 |
| 6.3.4 PS-PAD补料-分批发酵策略的构建 | 第88页 |
| 6.3.5 PS-PAD策略对GSGR-1发酵水平的影响 | 第88-90页 |
| 6.3.6 PS-PAD策略对ε-PL合成代谢途径的调控 | 第90-91页 |
| 6.3.7 PS-PAD策略对细胞呼吸活力的影响 | 第91-92页 |
| 6.3.8 PS-PAD策略对胞内ATP的影响 | 第92-93页 |
| 6.3.9 PS-PAD策略对呼吸链活力动态的影响 | 第93-94页 |
| 6.3.10 G67,GSG-1,GSGR-1在PS-PAD策略下的补料-分批发酵水平 | 第94-96页 |
| 6.4 小结 | 第96-97页 |
| 主要结论与展望 | 第97-99页 |
| 主要结论 | 第97-98页 |
| 展望 | 第98-99页 |
| 论文创新点 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 附录：附表 | 第110-117页 |
| 附录：附图 | 第117-122页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第122-123页 |
| 附录：本课题项目支持 | 第123页 |
