| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1.1 环糊精概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 环糊精的组成与结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 环糊精的理化生性质 | 第13-14页 |
| 1.1.3 环糊精的制备 | 第14-16页 |
| 1.1.4 环糊精的工业应用 | 第16-17页 |
| 1.2 CGT酶概述 | 第17-30页 |
| 1.2.1 CGT酶的分类与功能 | 第17-18页 |
| 1.2.2 CGT酶的结构 | 第18-19页 |
| 1.2.3 CGT酶的底物结合 | 第19-24页 |
| 1.2.4 CGT酶的转糖基反应机理 | 第24页 |
| 1.2.5 CGT酶的环化机理 | 第24-25页 |
| 1.2.6 CGT酶产物特异性的研究 | 第25-29页 |
| 1.2.7 CGT酶发酵生产的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.3 立题依据与意义 | 第30-31页 |
| 1.4 本论文的主要研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 -7亚位点对CGT酶产物特异性的影响 | 第32-47页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 材料与方法 | 第32-37页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.2 蛋白序列及序列分析 | 第33页 |
| 2.2.3 蛋白结构模拟及分析 | 第33页 |
| 2.2.4 主要试剂 | 第33页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.6 培养基 | 第34页 |
| 2.2.7 突变体的构建与转化 | 第34-35页 |
| 2.2.8 突变体的胞外表达 | 第35页 |
| 2.2.9 突变体的纯化及分析 | 第35-36页 |
| 2.2.10 CGT酶环化活性的测定 | 第36页 |
| 2.2.11 CGT酶产物制备与分析 | 第36-37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-46页 |
| 2.3.1 CGT酶序列、结构分析及突变位点的选择 | 第37-38页 |
| 2.3.2 CGT酶突变体的构建、重组表达及纯化 | 第38-40页 |
| 2.3.3 CGT酶及-7亚位点突变体的动力学特性 | 第40-41页 |
| 2.3.4 CGT酶-7亚位点突变体的产物特异性分析 | 第41-43页 |
| 2.3.5 CGT酶-7亚位点影响产物特异性机制分析 | 第43-44页 |
| 2.3.6 理性设计—封闭-7亚位点提高α-环糊精特异性 | 第44-46页 |
| 2.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 -3亚位点对CGT酶产物特异性的影响 | 第47-61页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 材料与方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 3.2.2 蛋白序列及序列分析 | 第47页 |
| 3.2.3 蛋白结构模拟及分析 | 第47-48页 |
| 3.2.4 试剂 | 第48页 |
| 3.2.5 仪器 | 第48页 |
| 3.2.6 培养基 | 第48页 |
| 3.2.7 突变体的构建与转化 | 第48页 |
| 3.2.8 突变体的胞外表达 | 第48页 |
| 3.2.9 突变体的纯化及分析 | 第48-49页 |
| 3.2.10 CGT酶环化活力的测定 | 第49页 |
| 3.2.11 CGT酶产物制备与分析 | 第49页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第49-59页 |
| 3.3.1 CGT酶序列、结构分析及突变位点选择 | 第49-51页 |
| 3.3.2 CGT酶突变体的构建、重组表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3.3.3 CGT酶及突变体的环化活性 | 第52-54页 |
| 3.3.4 CGT酶及突变体转化淀粉合成环糊精产物特异性影响 | 第54-56页 |
| 3.3.5 -3亚位点影响环化活性及产物特异性的机制分析 | 第56-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第四章 中心亚位点、-7亚位点以及与-3亚位点的组合突变对CGT酶产物特异性的影响 | 第61-71页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 材料与方法 | 第61-63页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第61页 |
| 4.2.2 蛋白序列 | 第61页 |
| 4.2.3 蛋白结构模拟及分析 | 第61页 |
| 4.2.4 试剂 | 第61页 |
| 4.2.5 仪器 | 第61-62页 |
| 4.2.6 培养基 | 第62页 |
| 4.2.7 突变体的构建与转化 | 第62页 |
| 4.2.8 突变体的胞外表达 | 第62页 |
| 4.2.9 突变体的纯化及分析 | 第62页 |
| 4.2.10 CGT酶环化活力的测定 | 第62页 |
| 4.2.11 CGT酶产物制备与分析 | 第62-63页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第63-70页 |
| 4.3.1 CGT酶序列、结构分析及突变位点选择 | 第63-64页 |
| 4.3.2 CGT酶突变体的构建、重组表达及纯化 | 第64-65页 |
| 4.3.3 CGT酶及突变体的环化活性 | 第65-67页 |
| 4.3.4 CGT酶及突变体转化淀粉合成环糊精 | 第67-69页 |
| 4.3.5 综合设计提高CGT酶产γ-环糊精特异性 | 第69-70页 |
| 4.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第五章 复合剂对CGT酶及突变体制备环糊精影响 | 第71-82页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 材料与方法 | 第71-74页 |
| 5.2.1 酶 | 第71-72页 |
| 5.2.2 试剂 | 第72页 |
| 5.2.3 仪器 | 第72页 |
| 5.2.4 装置 | 第72-73页 |
| 5.2.5 环糊精酶法合成及检测 | 第73-74页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第74-80页 |
| 5.3.1 醇类复合剂对不同CGT酶制备α-环糊精的影响 | 第74-78页 |
| 5.3.2 环状复合剂对CGT酶制备γ-环糊精的影响 | 第78-80页 |
| 5.4 本章小结 | 第80-82页 |
| 第六章 Γ-CGT酶发酵优化 | 第82-95页 |
| 6.1 引言 | 第82页 |
| 6.2 材料与方法 | 第82-84页 |
| 6.2.1 菌株与质粒 | 第82页 |
| 6.2.2 试剂和仪器 | 第82-83页 |
| 6.2.3 培养基与培养条件 | 第83页 |
| 6.2.4 重组γ-CGT酶的定位 | 第83-84页 |
| 6.2.5 分析方法 | 第84页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第84-93页 |
| 6.3.1 化学小分子伴侣对大肠杆菌产γ-CGT酶的影响 | 第84-85页 |
| 6.3.2 环糊精添加对γ-CGT酶比活的影响及可溶表达的过程分析 | 第85-87页 |
| 6.3.3 不同浓度β-环糊精对大肠杆菌产γ-CGT酶影响 | 第87-88页 |
| 6.3.4 不同浓度甘氨酸对大肠杆菌产γ-CGT酶的影响 | 第88-89页 |
| 6.3.5 温度和诱导剂对大肠杆菌产γ-CGT酶的影响 | 第89-91页 |
| 6.3.6 3-L罐水平的大肠杆菌发酵产γ-CGT酶 | 第91-92页 |
| 6.3.7 摇瓶和3-L罐水平大肠杆菌发酵产γ-CGT酶参数比较 | 第92-93页 |
| 6.4 本章小结 | 第93-95页 |
| 主要结论与展望 | 第95-98页 |
| 主要结论 | 第95-97页 |
| 展望 | 第97-98页 |
| 论文主要创新点 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第108页 |
