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环糊精葡萄糖基转移酶的产物特异性分子改造及发酵制备研究

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
第一章 绪论第12-32页
    1.1 环糊精概述第12-17页
        1.1.1 环糊精的组成与结构第12-13页
        1.1.2 环糊精的理化生性质第13-14页
        1.1.3 环糊精的制备第14-16页
        1.1.4 环糊精的工业应用第16-17页
    1.2 CGT酶概述第17-30页
        1.2.1 CGT酶的分类与功能第17-18页
        1.2.2 CGT酶的结构第18-19页
        1.2.3 CGT酶的底物结合第19-24页
        1.2.4 CGT酶的转糖基反应机理第24页
        1.2.5 CGT酶的环化机理第24-25页
        1.2.6 CGT酶产物特异性的研究第25-29页
        1.2.7 CGT酶发酵生产的研究进展第29-30页
    1.3 立题依据与意义第30-31页
    1.4 本论文的主要研究内容第31-32页
第二章 -7亚位点对CGT酶产物特异性的影响第32-47页
    2.1 引言第32页
    2.2 材料与方法第32-37页
        2.2.1 菌株与质粒第32-33页
        2.2.2 蛋白序列及序列分析第33页
        2.2.3 蛋白结构模拟及分析第33页
        2.2.4 主要试剂第33页
        2.2.5 主要仪器第33-34页
        2.2.6 培养基第34页
        2.2.7 突变体的构建与转化第34-35页
        2.2.8 突变体的胞外表达第35页
        2.2.9 突变体的纯化及分析第35-36页
        2.2.10 CGT酶环化活性的测定第36页
        2.2.11 CGT酶产物制备与分析第36-37页
    2.3 结果与讨论第37-46页
        2.3.1 CGT酶序列、结构分析及突变位点的选择第37-38页
        2.3.2 CGT酶突变体的构建、重组表达及纯化第38-40页
        2.3.3 CGT酶及-7亚位点突变体的动力学特性第40-41页
        2.3.4 CGT酶-7亚位点突变体的产物特异性分析第41-43页
        2.3.5 CGT酶-7亚位点影响产物特异性机制分析第43-44页
        2.3.6 理性设计—封闭-7亚位点提高α-环糊精特异性第44-46页
    2.4 本章小结第46-47页
第三章 -3亚位点对CGT酶产物特异性的影响第47-61页
    3.1 引言第47页
    3.2 材料与方法第47-49页
        3.2.1 菌株与质粒第47页
        3.2.2 蛋白序列及序列分析第47页
        3.2.3 蛋白结构模拟及分析第47-48页
        3.2.4 试剂第48页
        3.2.5 仪器第48页
        3.2.6 培养基第48页
        3.2.7 突变体的构建与转化第48页
        3.2.8 突变体的胞外表达第48页
        3.2.9 突变体的纯化及分析第48-49页
        3.2.10 CGT酶环化活力的测定第49页
        3.2.11 CGT酶产物制备与分析第49页
    3.3 结果与讨论第49-59页
        3.3.1 CGT酶序列、结构分析及突变位点选择第49-51页
        3.3.2 CGT酶突变体的构建、重组表达与纯化第51-52页
        3.3.3 CGT酶及突变体的环化活性第52-54页
        3.3.4 CGT酶及突变体转化淀粉合成环糊精产物特异性影响第54-56页
        3.3.5 -3亚位点影响环化活性及产物特异性的机制分析第56-59页
    3.4 本章小结第59-61页
第四章 中心亚位点、-7亚位点以及与-3亚位点的组合突变对CGT酶产物特异性的影响第61-71页
    4.1 引言第61页
    4.2 材料与方法第61-63页
        4.2.1 菌株与质粒第61页
        4.2.2 蛋白序列第61页
        4.2.3 蛋白结构模拟及分析第61页
        4.2.4 试剂第61页
        4.2.5 仪器第61-62页
        4.2.6 培养基第62页
        4.2.7 突变体的构建与转化第62页
        4.2.8 突变体的胞外表达第62页
        4.2.9 突变体的纯化及分析第62页
        4.2.10 CGT酶环化活力的测定第62页
        4.2.11 CGT酶产物制备与分析第62-63页
    4.3 结果与讨论第63-70页
        4.3.1 CGT酶序列、结构分析及突变位点选择第63-64页
        4.3.2 CGT酶突变体的构建、重组表达及纯化第64-65页
        4.3.3 CGT酶及突变体的环化活性第65-67页
        4.3.4 CGT酶及突变体转化淀粉合成环糊精第67-69页
        4.3.5 综合设计提高CGT酶产γ-环糊精特异性第69-70页
    4.4 本章小结第70-71页
第五章 复合剂对CGT酶及突变体制备环糊精影响第71-82页
    5.1 引言第71页
    5.2 材料与方法第71-74页
        5.2.1 酶第71-72页
        5.2.2 试剂第72页
        5.2.3 仪器第72页
        5.2.4 装置第72-73页
        5.2.5 环糊精酶法合成及检测第73-74页
    5.3 结果与讨论第74-80页
        5.3.1 醇类复合剂对不同CGT酶制备α-环糊精的影响第74-78页
        5.3.2 环状复合剂对CGT酶制备γ-环糊精的影响第78-80页
    5.4 本章小结第80-82页
第六章 Γ-CGT酶发酵优化第82-95页
    6.1 引言第82页
    6.2 材料与方法第82-84页
        6.2.1 菌株与质粒第82页
        6.2.2 试剂和仪器第82-83页
        6.2.3 培养基与培养条件第83页
        6.2.4 重组γ-CGT酶的定位第83-84页
        6.2.5 分析方法第84页
    6.3 结果与讨论第84-93页
        6.3.1 化学小分子伴侣对大肠杆菌产γ-CGT酶的影响第84-85页
        6.3.2 环糊精添加对γ-CGT酶比活的影响及可溶表达的过程分析第85-87页
        6.3.3 不同浓度β-环糊精对大肠杆菌产γ-CGT酶影响第87-88页
        6.3.4 不同浓度甘氨酸对大肠杆菌产γ-CGT酶的影响第88-89页
        6.3.5 温度和诱导剂对大肠杆菌产γ-CGT酶的影响第89-91页
        6.3.6 3-L罐水平的大肠杆菌发酵产γ-CGT酶第91-92页
        6.3.7 摇瓶和3-L罐水平大肠杆菌发酵产γ-CGT酶参数比较第92-93页
    6.4 本章小结第93-95页
主要结论与展望第95-98页
    主要结论第95-97页
    展望第97-98页
论文主要创新点第98-99页
致谢第99-100页
参考文献第100-108页
附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文第108页

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