| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·海藻糖合酶的概述 | 第9-12页 |
| ·海藻糖合酶的来源 | 第9页 |
| ·海藻糖合酶的催化机制 | 第9-10页 |
| ·海藻糖合酶的酶学性质和应用 | 第10-11页 |
| ·海藻糖合酶的改造和制备 | 第11-12页 |
| ·海藻糖的概述 | 第12-15页 |
| ·海藻糖的理化性质 | 第12页 |
| ·海藻糖的应用 | 第12-13页 |
| ·海藻糖的制备工艺 | 第13-15页 |
| ·课题的立题依据及意义 | 第15-16页 |
| ·课题的主要研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料和方法 | 第17-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·细胞培养 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·培养方法 | 第18-19页 |
| ·分子生物学操作 | 第19-21页 |
| ·海藻糖合酶基因的克隆 | 第19页 |
| ·含目的基因的质粒的双酶切 | 第19-20页 |
| ·目的DNA片段的胶回收 | 第20页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第20页 |
| ·E. coli感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·E. coli感受态细胞的热激转化 | 第20页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第20页 |
| ·突变体的构建与转化 | 第20-21页 |
| ·密码子优化 | 第21页 |
| ·分析方法 | 第21-23页 |
| ·大肠杆菌细胞光密度(OD600)的测定 | 第21页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第21页 |
| ·细胞破碎 | 第21-22页 |
| ·海藻糖合酶酶活力测定 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第22-23页 |
| ·分子模拟 | 第23页 |
| ·海藻糖合酶的酶学性质 | 第23-24页 |
| ·最适pH | 第23页 |
| ·pH稳定性 | 第23页 |
| ·最适温度 | 第23-24页 |
| ·温度稳定性 | 第24页 |
| ·蛋白纯化 | 第24页 |
| ·海藻糖的制备 | 第24-25页 |
| ·海藻糖合酶转苷条件的研究 | 第24页 |
| ·海藻糖合酶转化海藻糖得率计算 | 第24-25页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第25-45页 |
| ·海藻糖合酶的重组表达及其应用 | 第25-30页 |
| ·重组表达质粒pET24a(+)-TreS的构建及海藻糖合酶的诱导表达 | 第25-27页 |
| ·海藻糖合酶制备海藻糖的工艺优化 | 第27-30页 |
| ·海藻糖合酶突变体的重组表达及其应用 | 第30-39页 |
| ·海藻糖合酶突变位点的选择 | 第30-31页 |
| ·海藻糖合酶的定点突变和诱导表达 | 第31-32页 |
| ·海藻糖合酶及其突变体的纯化 | 第32-33页 |
| ·海藻糖合酶及其突变体的最适温度和温度稳定性 | 第33-34页 |
| ·海藻糖合酶及其突变体的最适pH和pH稳定性 | 第34-35页 |
| ·海藻糖合酶突变体制备海藻糖的工艺优化 | 第35-39页 |
| ·海藻糖合酶突变体的密码子优化及其发酵条件优化 | 第39-45页 |
| ·海藻糖合酶突变体的密码子优化 | 第39-40页 |
| ·重组菌的构建及海藻糖合酶的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组菌的 3L罐发酵条件优化 | 第41-43页 |
| ·重组菌 30L罐初步放大 | 第43-44页 |
| ·高温处理菌悬液释放海藻糖合酶的研究 | 第44-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-47页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |