| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·磷脂酶概述 | 第8-9页 |
| ·磷脂酶 C | 第9-12页 |
| ·磷脂酶 C 的种类 | 第9页 |
| ·磷脂酶 C 的来源 | 第9页 |
| ·C. perfringens 磷脂酶 C | 第9-10页 |
| ·磷脂酶 C 的研究现状 | 第10-11页 |
| ·磷脂酶 C 的应用 | 第11-12页 |
| ·植物油酶法脱胶的研究进展 | 第12-14页 |
| ·PLA 酶法脱胶 | 第12-13页 |
| ·PLB 酶法脱胶 | 第13页 |
| ·PLC 酶法脱胶 | 第13-14页 |
| ·本课题的立题意义和研究内容 | 第14-16页 |
| ·立题意义 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 产气荚膜梭菌磷脂酶 C 的克隆表达 | 第16-25页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·菌种与质粒 | 第16页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第16页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第16-17页 |
| ·C.perfringens PLC 基因的引物 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-20页 |
| ·C.perfringens 基因组 DNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·质粒的提取 | 第18页 |
| ·DNA 的纯化和回收 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第18-19页 |
| ·C.perfringens 磷脂酶 C 基因的克隆 | 第19页 |
| ·限制性内切酶的双酶切 | 第19页 |
| ·表达质粒 pET-28a/Cp-plc 和 pET-28a/Cp-nplc 的构建 | 第19页 |
| ·plc 基因在 E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第19-20页 |
| ·Cp -PLC 酶活的定性分析 | 第20页 |
| ·结果与讨论 | 第20-24页 |
| ·C.perfringens 磷脂酶 C 基因的 PCR 扩增 | 第20页 |
| ·表达质粒 pET-28a/Cp-plc 和 pET-28a/Cp-nplc 的构建 | 第20-22页 |
| ·重组磷脂酶 C 的 SDS-PAGE 和卵黄硼砂平板鉴定 | 第22-24页 |
| ·本章小结 | 第24-25页 |
| 第三章 重组 Cp-PLC 的发酵优化及蛋白纯化 | 第25-36页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·菌种 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·PLC 酶活的测定方法 | 第25-26页 |
| ·发酵培养基的选择 | 第26页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第26页 |
| ·E. coli BL21(pET-28a/Cp-plc)发酵条件的摇瓶优化 | 第26-27页 |
| ·Cp-PLC 粗酶液的制备 | 第27页 |
| ·重组 Cp-PLC 的亲和层析 | 第27页 |
| ·重组 Cp-PLC 的凝胶过滤层析 | 第27页 |
| ·二喹啉甲酸 BCA 法测定蛋白质浓度 | 第27-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-34页 |
| ·对硝基苯酚浓度的标准曲线及 PLC 酶活的计算方法 | 第28页 |
| ·E. coli BL21(pET-28a/Cp-plc)发酵培养基的确定 | 第28-29页 |
| ·E. coli BL21(pET-28a/Cp-plc)发酵条件的摇瓶优化 | 第29-31页 |
| ·重组 Cp-PLC 的亲和层析和 SDS-PAGE | 第31-33页 |
| ·重组 Cp-PLC 的凝胶过滤层析和 SDS-PAGE | 第33-34页 |
| ·Cp-PLC 的比酶活 | 第34页 |
| ·本章小结 | 第34-36页 |
| 第四章 重组 Cp-PLC 的底物特异性和脱胶应用的研究 | 第36-51页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·利用 HPLC 分析磷脂的色谱条件 | 第37页 |
| ·利用 HPLC 分析甘二酯的色谱条件 | 第37页 |
| ·磷脂标准样品的配制 | 第37页 |
| ·Cp-PLC 与磷脂的反应条件 | 第37页 |
| ·HPLC 样品的制备 | 第37-38页 |
| ·Cp-PLC 对菜籽毛油酶法脱胶的方法 | 第38页 |
| ·Cp-PLC 对大豆毛油精炼率影响的研究方法 | 第38页 |
| ·油相 pH 的测定 | 第38页 |
| ·磷含量的测定 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-50页 |
| ·PE 和 PA 的标准曲线 | 第38-39页 |
| ·重组 Cp-PLC 对 PE 的水解作用 | 第39-41页 |
| ·重组 Cp-PLC 对 PC 的水解作用 | 第41-42页 |
| ·重组 Cp-PLC 对 PA 的水解作用 | 第42-44页 |
| ·重组 Cp-PLC 对 PI 的水解作用 | 第44-45页 |
| ·重组 Cp-PLC 水解 PE 的产物分析 | 第45-46页 |
| ·重组 Cp-PLC 水解 PC 的产物分析 | 第46-47页 |
| ·重组 Cp-PLC 对菜籽毛油的脱胶效果 | 第47-49页 |
| ·重组 Cp-PLC 对大豆毛油精炼率的影响 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51-52页 |
| 展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录 1：本文涉及的核苷酸和氨基酸序列 | 第58-59页 |
| 附录 2：作者在攻读硕士学位期间发表的论文及成果 | 第59页 |
