| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略符号 | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 产油微生物 | 第12-13页 |
| 1.2 卷枝毛霉脂质合成研究进展 | 第13-19页 |
| 1.2.1 卷枝毛霉简介 | 第13页 |
| 1.2.2 卷枝毛霉脂肪酸合成机制的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.3 脂肪酶在脂质代谢中的角色 | 第19-20页 |
| 1.3.1 脂肪酶简介 | 第19页 |
| 1.3.2 微生物脂肪酶的功能 | 第19-20页 |
| 1.4 论文的研究目的与意义 | 第20页 |
| 1.5 论文的主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 卷枝毛霉脂肪酶的生物信息学及其在脂质积累过程中的转录分析 | 第22-44页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料与设备 | 第22-24页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第22页 |
| 2.2.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2.4 实验仪器与设备 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 脂肪酶基因的鉴定 | 第24页 |
| 2.3.2 脂肪酶的亚细胞定位、信号肽与跨膜结构分析 | 第24页 |
| 2.3.3 脂肪酶的系统进化树构建与同源性分析 | 第24页 |
| 2.3.4 卷枝毛霉发酵培养 | 第24页 |
| 2.3.5 培养上清液中葡萄糖与NH4~+浓度的测定 | 第24-25页 |
| 2.3.6 生物量与脂肪酸组成测定 | 第25页 |
| 2.3.7 脂肪酶基因的转录分析 | 第25-26页 |
| 2.3.8 数据分析 | 第26页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第26-42页 |
| 2.4.1 卷枝毛霉脂肪酶基因的鉴定 | 第26-34页 |
| 2.4.2 卷枝毛霉脂肪酶的亚细胞定位、信号肽与跨膜结构 | 第34-36页 |
| 2.4.3 卷枝毛霉脂肪酶的系统进化树与同源性 | 第36-38页 |
| 2.4.4 卷枝毛霉的细胞生长和脂质积累分析 | 第38-39页 |
| 2.4.5 卷枝毛霉脂肪酶基因的转录分析 | 第39-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 葡萄糖-油脂混合培养基对卷枝毛霉细胞生长和脂质积累的影响 | 第44-56页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 材料与设备 | 第44-45页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第44页 |
| 3.2.2 培养基与相关溶液 | 第44-45页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第45页 |
| 3.2.4 实验仪器与设备 | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.3.1 葡萄糖-油脂混合培养基的制备 | 第45页 |
| 3.3.2 卷枝毛霉的发酵培养 | 第45页 |
| 3.3.3 培养上清液中葡萄糖浓度测定 | 第45-46页 |
| 3.3.4 生物量与脂肪酸组成测定 | 第46页 |
| 3.3.5 薄层色谱分析胞内脂质组成变化 | 第46页 |
| 3.3.6 发酵液与菌丝体内脂肪酶活性分析 | 第46页 |
| 3.3.7 胞外脂肪酶基因的转录分析 | 第46页 |
| 3.3.8 数据分析 | 第46-47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-54页 |
| 3.4.1 葡萄糖-油脂混合培养基对卷枝毛霉细胞生长与脂质积累的影响 | 第47-52页 |
| 3.4.2 葡萄糖-油脂混合培养基对卷枝毛霉脂质组成的影响 | 第52页 |
| 3.4.3 葡萄糖-油脂混合培养基对卷枝毛霉脂肪酶活性与转录水平的影响 | 第52-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 卷枝毛霉脂肪酶调控脂质代谢机制的初步研究 | 第56-70页 |
| 4.1 前言 | 第56-57页 |
| 4.2 材料与设备 | 第57-58页 |
| 4.2.1 实验菌株与质粒 | 第57页 |
| 4.2.2 培养基与相关溶液 | 第57-58页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第58页 |
| 4.2.4 实验仪器与设备 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-63页 |
| 4.3.1 脂肪酶基因Lip6、Lip10、Lip19和Lip24表达质粒的构建 | 第58-61页 |
| 4.3.2 卷枝毛霉的转化 | 第61-62页 |
| 4.3.3 卷枝毛霉重组菌株的培养 | 第62页 |
| 4.3.4 重组菌株生物量与脂肪酸组成测定 | 第62-63页 |
| 4.3.5 重组菌株脂肪酶基因的转录分析 | 第63页 |
| 4.3.6 脂肪酶的生物信息学分析 | 第63页 |
| 4.3.7 数据分析 | 第63页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第63-69页 |
| 4.4.1 卷枝毛霉CBS277.49中脂肪酶过表达质粒的构建 | 第63-64页 |
| 4.4.2 卷枝毛霉的转化与重组菌株的验证 | 第64-65页 |
| 4.4.3 重组菌株的细胞生长与脂质积累分析 | 第65-67页 |
| 4.4.4 重组菌株中脂肪酶基因转录分析 | 第67-68页 |
| 4.4.5 脂肪酶Lip6、Lip10、Lip19和Lip24的生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 卷枝毛霉脂肪酶Lip6与Lip10在脂质代谢中的双重角色 | 第70-89页 |
| 5.1 前言 | 第70页 |
| 5.2 材料与设备 | 第70-71页 |
| 5.2.1 实验菌株与质粒 | 第70-71页 |
| 5.2.2 培养基与相关溶液 | 第71页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第71页 |
| 5.2.4 实验仪器与设备 | 第71页 |
| 5.3 实验方法 | 第71-75页 |
| 5.3.1 Lip6和Lip10基因的定点突变与质粒构建 | 第71-72页 |
| 5.3.2 卷枝毛霉的转化 | 第72页 |
| 5.3.3 Lip6和Lip10突变体卷枝毛霉重组菌株的发酵培养 | 第72-73页 |
| 5.3.4 重组菌株生物量与脂肪酸组成的测定 | 第73页 |
| 5.3.5 薄层色谱分析 | 第73页 |
| 5.3.6 磷脂合成关键基因的转录分析 | 第73页 |
| 5.3.7 Lip6和Lip10突变体在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第73-74页 |
| 5.3.8 肪酶活性与PDAT活性分析 | 第74-75页 |
| 5.3.9 数据分析 | 第75页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第75-87页 |
| 5.4.1 Lip6和Lip10突变体重组菌株的构建 | 第75-77页 |
| 5.4.2 Lip6和Lip10突变体的细胞生长与脂质积累分析 | 第77-80页 |
| 5.4.3 Lip6和Lip10在卷枝毛霉脂质代谢中的双重角色分析 | 第80-81页 |
| 5.4.4 Lip6和Lip10突变体的体外和卷枝毛霉胞内脂肪酶与PDAT活性分析 | 第81-84页 |
| 5.4.5 Lip6和Lip10突变体中磷脂代谢途径及其关键基因的转录分析 | 第84-87页 |
| 5.5 本章小结 | 第87-89页 |
| 主要结论与展望 | 第89-91页 |
| 论文创新点 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 附录 Ⅰ:RT-PCR引物 | 第103-107页 |
| 附录 Ⅱ:作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第107页 |
