| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略语 | 第6-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 Bt蛋白及其研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 Bt蛋白 | 第11页 |
| 1.1.2 Bt蛋白分类及命名 | 第11-12页 |
| 1.1.3 Bt蛋白的毒作用机理 | 第12页 |
| 1.1.4 Bt蛋白的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.5 Bt蛋白的检测意义 | 第13-14页 |
| 1.1.6 Bt蛋白的检测技术 | 第14-15页 |
| 1.2 Bt蛋白免疫分析中的新型免疫元件 | 第15-19页 |
| 1.2.1 单链抗体 | 第16-17页 |
| 1.2.2 驼源性纳米抗体 | 第17-19页 |
| 1.3 本课题研究内容和意义 | 第19-20页 |
| 第2章 Cry1Ac单克隆抗体的制备及其在免疫学分析中的应用研究 | 第20-41页 |
| 2.1 主要实验材料 | 第20页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.3 主要试剂及配置 | 第20-22页 |
| 2.4 抗Cry1Ac单克隆抗体的制备 | 第22-28页 |
| 2.4.1 小鼠免疫与抗血清测定 | 第22-23页 |
| 2.4.2 脾细胞与骨髓瘤细胞融合 | 第23-25页 |
| 2.4.3 杂交瘤细胞筛选 | 第25-26页 |
| 2.4.4 单克隆细胞的冻存与复苏 | 第26页 |
| 2.4.5 单克隆抗体腹水制备 | 第26-27页 |
| 2.4.6 腹水中单克隆抗体的粗纯化及其纯化效果分析 | 第27页 |
| 2.4.7 间接ELISA测定腹水和纯化抗体效价 | 第27页 |
| 2.4.8 单克隆抗体特异性 | 第27-28页 |
| 2.5 单克隆抗体抗原识别位点初步鉴定 | 第28-29页 |
| 2.5.1 Cry1Ac最佳包被浓度测定 | 第28页 |
| 2.5.2 单克隆抗体饱和稀释度测定 | 第28页 |
| 2.5.3 单克隆抗体ELISA叠加实验 | 第28-29页 |
| 2.6 HRP酶标记单克隆抗体（三聚氰氯快速标记法[]） | 第29-30页 |
| 2.7 酶标抗体的鉴定 | 第30页 |
| 2.8 双抗夹心ELISA检测单克隆抗体与酶标抗体匹配效果 | 第30-31页 |
| 2.9 基于单克隆抗体和酶标抗体双抗夹心ELISA标准曲线的建立 | 第31-32页 |
| 2.9.1 捕获抗体包被浓度的确定 | 第31页 |
| 2.9.2 酶标抗体最佳工作浓度的确定 | 第31页 |
| 2.9.3 以单克隆抗体和酶标抗体双抗夹心ELISA标准曲线的建立 | 第31-32页 |
| 2.10实验结果 | 第32-39页 |
| 2.10.1 免疫小鼠血清效价测定 | 第32-33页 |
| 2.10.2 杂交瘤细胞阳性克隆筛选与亚克隆 | 第33页 |
| 2.10.3 单克隆抗体腹水纯化效果和纯化前后效价测定 | 第33-34页 |
| 2.10.4 单克隆抗体特异性 | 第34-35页 |
| 2.10.5 单克隆抗体叠加ELISA对8株抗体识别表位进行初步分析 | 第35-36页 |
| 2.10.6 单克隆抗体 3A5和 9F10 HRP酶标记结果 | 第36页 |
| 2.10.7 基于单克隆抗体和酶标抗体双抗夹心ELISA建立 | 第36-39页 |
| 2.11讨论 | 第39-40页 |
| 2.11.1 单克隆抗体抗原识别表位分析 | 第39-40页 |
| 2.11.2 检测方法优越性 | 第40页 |
| 2.12小结 | 第40-41页 |
| 第3章 Cry1Ac纳米抗体的淘选、鉴定及其在免疫学分析中的应用研究 | 第41-54页 |
| 3.1 主要实验材料 | 第41页 |
| 3.2 主要设备 | 第41-42页 |
| 3.3 主要试剂及配置 | 第42页 |
| 3.4 Cry1Ac纳米抗体的淘选和鉴定 | 第42-46页 |
| 3.4.1 Cry1Ac蛋白对纳米抗体库的亲和淘选 | 第42-43页 |
| 3.4.2 洗脱噬菌体的扩增、纯化与滴度测定 | 第43页 |
| 3.4.3 噬菌体阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第43-46页 |
| 3.5 双抗夹心phage-ELISA的建立 | 第46-47页 |
| 3.5.1 双抗夹心ELISA检测自制单克隆抗体与特异性噬菌体匹配效果 | 第46页 |
| 3.5.2 基于自制单克隆抗体和特异性噬菌体双抗夹心phage-ELISA的建立 | 第46-47页 |
| 3.6 实验结果 | 第47-52页 |
| 3.6.1 以Cry1Ac蛋白为靶分子的亲和淘选 | 第47页 |
| 3.6.2 特异性噬菌体克隆的鉴定及其序列分析 | 第47-50页 |
| 3.6.3 双抗夹心ELISA检测自制单克隆抗体与噬菌体匹配效果 | 第50-51页 |
| 3.6.4 基于单克隆抗体 8A8和特异性噬菌体P72双抗夹心phage-ELISA的建立 | 第51-52页 |
| 3.7 讨论 | 第52-53页 |
| 3.8 小结 | 第53-54页 |
| 第4章 抗Cry1Ac纳米抗体的表达及其在免疫学分析中的应用研究 | 第54-69页 |
| 4.1 主要实验材料 | 第54页 |
| 4.2 主要设备 | 第54-55页 |
| 4.3 主要试剂及配置 | 第55页 |
| 4.4 Cry1Ab纳米抗体表达载体的构建 | 第55-57页 |
| 4.4.1 提取P10、P24和P72质粒 | 第55页 |
| 4.4.2 大肠杆菌DH5α和Rosetta感受态细胞的制备 | 第55-56页 |
| 4.4.3 重组表达载体的构建 | 第56-57页 |
| 4.5 Cry1Ac纳米抗体的表达与纯化 | 第57-58页 |
| 4.6 基于纳米抗体和噬菌体双抗夹心phage-ELISA的建立 | 第58-59页 |
| 4.6.1 双抗夹心ELISA检测三种纳米抗体和三种噬菌体匹配效果 | 第58页 |
| 4.6.2 基于纳米抗体双抗夹心phage-ELISA标准曲线的建立 | 第58-59页 |
| 4.7 基于单克隆抗体和纳米抗体双抗夹心ELISA的建立 | 第59-60页 |
| 4.7.1 采用双抗夹心ELISA分析纳米抗体和单克隆抗体的匹配效果 | 第59-60页 |
| 4.7.2 基于纳米抗体和单克隆抗体双抗夹心ELISA标准曲线的建立 | 第60页 |
| 4.8 实验结果 | 第60-68页 |
| 4.8.1 纳米抗体表达载体的构建和目的蛋白的表达 | 第60-62页 |
| 4.8.2 基于纳米抗体双抗夹心phage-ELISA的建立 | 第62-66页 |
| 4.8.3 基于纳米抗体和自制单抗隆抗体双抗夹心ELISA的建立 | 第66-68页 |
| 4.9 讨论 | 第68页 |
| 4.10 小结 | 第68-69页 |
| 第5章 结论与展望 | 第69-70页 |
| 5.1 结论 | 第69页 |
| 5.2 进一步待完成工作方向 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简介 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
