| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-23页 |
| 1.1 质粒的研究概况 | 第9-12页 |
| 1.1.1 质粒 | 第9-10页 |
| 1.1.2 质粒的拷贝数 | 第10-11页 |
| 1.1.3 质粒的稳定性 | 第11-12页 |
| 1.2 重组蛋白的生产 | 第12-15页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR概述 | 第15-18页 |
| 1.3.1 实时荧光定量PCR | 第15-16页 |
| 1.3.2 荧光定量PCR的应用 | 第16-18页 |
| 1.4 乳酸菌作为抗原载体的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.4.1 乳酸菌简介 | 第18页 |
| 1.4.2 乳酸菌的益生作用 | 第18-19页 |
| 1.4.3 乳酸菌的应用 | 第19-20页 |
| 1.5 产肠毒素性大肠杆菌 | 第20-21页 |
| 1.6 猪流行性腹泻 | 第21页 |
| 1.7 研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-34页 |
| 2.1 摇瓶培养下的乳酸菌质粒拷贝数和表达菌数的关系 | 第23-32页 |
| 2.1.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 方法 | 第24-32页 |
| 2.2 发酵罐培养下的乳酸菌质粒拷贝数和表达菌数的关系 | 第32-34页 |
| 2.2.1 材料 | 第32页 |
| 2.2.2 方法 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-50页 |
| 3.1 摇瓶培养下的乳酸菌质粒拷贝数和表达菌数的关系 | 第34-45页 |
| 3.1.1 阳性菌株鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1.2 重组干酪乳杆菌与受体菌株生长曲线 | 第35页 |
| 3.1.3 重组干酪乳杆菌质粒稳定性检测 | 第35-37页 |
| 3.1.4 PCR扩增16SrDNA和Cm目的基因 | 第37-38页 |
| 3.1.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.6 PCR扩增重组质粒的目的基因 | 第39页 |
| 3.1.7 16S rDNA基因及Cm基因标准曲线的建立 | 第39页 |
| 3.1.8 qPCR检测重组干酪乳杆菌质粒拷贝数 | 第39-42页 |
| 3.1.9 发酵时间与目标蛋白表达菌数之间的关系 | 第42-44页 |
| 3.1.10 质粒拷贝数与目标蛋白表达量之间的关系 | 第44-45页 |
| 3.2 发酵罐培养下的乳酸菌质粒拷贝数和表达菌数的关系 | 第45-50页 |
| 3.2.1 一级种子液及二级种子液活菌数的测定 | 第45页 |
| 3.2.2 发酵罐放大培养基因工程乳酸菌生长曲线的测定 | 第45-46页 |
| 3.2.3 发酵罐放大培养基因工程乳酸菌质粒拷贝数与目标蛋白表达菌数的测定 | 第46-50页 |
| 4 讨论 | 第50-56页 |
| 4.1 乳酸菌表达系统及其启动子 | 第50-51页 |
| 4.2 质粒的拷贝数对外源蛋白产生的影响 | 第51-53页 |
| 4.3 细菌数量对表达量的影响 | 第53页 |
| 4.4 发酵罐培养基因工程乳酸菌 | 第53-56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 个人简历 | 第72页 |
