| 中文摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第8-18页 |
| 1.1 单宁酶简介 | 第8页 |
| 1.2 单宁酶的性质 | 第8-9页 |
| 1.3 单宁酶的催化作用 | 第9-10页 |
| 1.4 单宁酶的来源 | 第10页 |
| 1.5 单宁酶的微生物发酵生产 | 第10-14页 |
| 1.5.1 产酶微生物 | 第10-11页 |
| 1.5.2 菌株选育 | 第11-12页 |
| 1.5.3 菌种筛选方法 | 第12-13页 |
| 1.5.4 发酵产单宁酶研究 | 第13-14页 |
| 1.5.5 酶活测定方法 | 第14页 |
| 1.5.5.1 分光光度计法 | 第14页 |
| 1.5.5.2 高效液相色谱法 | 第14页 |
| 1.6 单宁酶转化没食子酸 | 第14-16页 |
| 1.6.1 没食子酸的性质 | 第15页 |
| 1.6.2 没食子酸的制备 | 第15-16页 |
| 1.6.3 没食子酸的应用 | 第16页 |
| 1.7 课题研究的意义 | 第16页 |
| 1.8 课题研究内容 | 第16-18页 |
| 1.8.1 研究基础 | 第16-17页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 1.8.2.1 常压室温等离子体快速诱变选育单宁酶高产菌株 | 第17页 |
| 1.8.2.2 液态发酵产单宁酶工艺优化 | 第17页 |
| 1.8.2.3 单宁酶转化单宁酸制备没食子酸的研究 | 第17-18页 |
| 第2章 常压室温等离子体快速诱变选育单宁酶高产菌株 | 第18-32页 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 培养基 | 第19页 |
| 2.1.3.1 平板初筛培养基 | 第19页 |
| 2.1.3.2 菌种斜面保藏培养基 | 第19页 |
| 2.1.3.3 液态发酵培养基 | 第19页 |
| 2.1.3.4 固态发酵培养基 | 第19页 |
| 2.1.4 相关试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.4.1 柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液 | 第19-20页 |
| 2.1.4.2 没食子酸丙酯底物溶液 | 第20页 |
| 2.1.4.3 绕丹宁溶液 | 第20页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 孢子悬浮液的制备 | 第21页 |
| 2.2.2 诱变 | 第21-22页 |
| 2.2.2.1 诱变参数 | 第21页 |
| 2.2.2.2 样品载片制备及处理 | 第21-22页 |
| 2.2.2.3 培养计数 | 第22页 |
| 2.2.2.4 致死率和正突变率计算公式 | 第22页 |
| 2.2.3 初筛 | 第22页 |
| 2.2.4 复筛 | 第22-23页 |
| 2.2.4.1 液态发酵产酶 | 第22-23页 |
| 2.2.4.2 固态发酵产酶 | 第23页 |
| 2.2.5 酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.2.5.1 固态发酵酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.2.5.2 液态发酵酶活测定 | 第24页 |
| 2.2.6 单宁酶活力的测定标准曲线 | 第24页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第24-31页 |
| 2.3.1 ARTP诱变时间对黑曲霉B0201孢子致死率、正突变率的影响 | 第24-25页 |
| 2.3.2 初筛实验结果 | 第25-28页 |
| 2.3.3 复筛实验结果 | 第28-31页 |
| 2.3.3.1 液态发酵实验结果 | 第28-30页 |
| 2.3.3.2 固态发酵实验结果 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 液态发酵产单宁酶工艺优化 | 第32-45页 |
| 3.1 实验材料与仪器设备 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.2 培养基 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.2.1 液态发酵产酶 | 第33-34页 |
| 3.2.1.1 液态发酵培养 | 第33页 |
| 3.2.1.2 粗酶液的提取 | 第33-34页 |
| 3.2.2 酶活检测方法 | 第34页 |
| 3.2.3 单因素实验 | 第34页 |
| 3.2.4 多因素实验 | 第34页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第34-44页 |
| 3.3.1 单宁酸浓度对单宁酶酶活的影响 | 第34-36页 |
| 3.3.2 葡萄糖浓度对单宁酶酶活的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.3 培养时间对单宁酶酶活的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.4 接种量对单宁酶酶活的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.5 装液量对单宁酶酶活的影响 | 第39页 |
| 3.3.6 温度对单宁酶酶活的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.7 转速对单宁酶酶活的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.8 正交实验优化发酵工艺条件 | 第41-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 单宁酶转化单宁酸制备没食子酸的研究 | 第45-62页 |
| 4.1 材料与设备 | 第45-47页 |
| 4.1.1 菌种 | 第45页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第45-46页 |
| 4.1.3 液态培养基 | 第46页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 4.2 试验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 菌种活化 | 第47页 |
| 4.2.2 孢子悬浮液的制备 | 第47页 |
| 4.2.3 液态法培菌产酶 | 第47页 |
| 4.2.4 单宁酶酶活的测定方法 | 第47页 |
| 4.2.5 单宁酶摇瓶转化单宁酸制备没食子酸 | 第47页 |
| 4.2.6 单宁酶 5 L罐转化单宁酸制备没食子酸 | 第47-48页 |
| 4.2.7 没食子酸产率的测定方法 | 第48-49页 |
| 4.2.7.1 没食子酸最大吸收波长的确定 | 第48页 |
| 4.2.7.2 没食子酸的测定方法 | 第48-49页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第49-61页 |
| 4.3.1 没食子酸测定方法的建立 | 第49-51页 |
| 4.3.1.1 没食子酸吸收峰的确定 | 第49-50页 |
| 4.3.1.2 高效液相色谱条件的确定 | 第50-51页 |
| 4.3.2 液态摇瓶发酵产酶制备没食子酸的工艺研究 | 第51-56页 |
| 4.3.2.1 转化时间对没食子酸生产的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.2.2 一次性添加不同底物浓度对没食子酸生产的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.2.3 转化液p H对没食子酸生产的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.2.4 温度对没食子酸生产的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.2.5 转速对没食子酸生产的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.3 液态 5 L发酵产酶转化没食子酸的工艺研究 | 第56-61页 |
| 4.3.3.1 菌体生长p H的变化趋势 | 第56-57页 |
| 4.3.3.2 菌体生物量与产酶变化的趋势 | 第57-59页 |
| 4.3.3.3 转化时间对没食子酸生产的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.3.4 转化次数 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第5章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62-63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 图版 | 第70-72页 |
