| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| ·磷脂和磷脂酶简介 | 第8-9页 |
| ·磷脂酶 A_1概述 | 第9-13页 |
| ·磷脂酶 A_1的研究进展 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌 T7 表达系统及乳糖自诱导 | 第14-16页 |
| ·本课题的立题意义及研究内容 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-24页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-21页 |
| ·产磷脂酶菌株的筛选 | 第19页 |
| ·细菌基因组 DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·磷脂酶 A_1基因的克隆 | 第20页 |
| ·产磷脂酶 A_1重组大肠杆菌的构建 | 第20-21页 |
| ·重组大肠杆菌在摇瓶水平的诱导表达 | 第21页 |
| ·重组大肠杆菌在 7 L 发酵罐发酵培养 | 第21页 |
| ·分析方法 | 第21-24页 |
| ·磷脂酶 A_1活力的测定 | 第21-22页 |
| ·脂肪酶活力的测定 | 第22页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线的测定 | 第22页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第22页 |
| ·重组磷脂酶 A_1的 SDS-PAGE 分析 | 第22页 |
| ·重组磷脂酶 A_1的亲和层析 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-48页 |
| ·产磷脂酶 A_1菌株的筛选 | 第24-26页 |
| ·初筛 | 第24页 |
| ·复筛 | 第24-25页 |
| ·磷脂酶 A_1酶活测定方法的研究 | 第25-26页 |
| ·磷脂酶 A_1在大肠杆菌中的克隆表达及自诱导发酵 | 第26-43页 |
| ·磷脂酶 A_1基因的克隆及序列分析 | 第26-27页 |
| ·重组磷脂酶 A_1在大肠杆菌的诱导表达及目的蛋白分析 | 第27-29页 |
| ·附属基因 pls 对重组磷脂酶 A_1在大肠杆菌表达的影响 | 第29-30页 |
| ·重组菌 E. coli BL21(DE3)/pET28a-pla 产磷脂酶 A_1诱导方式的研究 | 第30-35页 |
| ·重组菌 E. coli BL21(DE3)/pET28a-pla 自诱导发酵条件的优化 | 第35-41页 |
| ·重组大肠杆菌在 7 L 发酵罐水平产磷脂酶 A_1的验证 | 第41-43页 |
| ·重组大肠杆菌产磷脂酶 A_1的酶学性质研究 | 第43-48页 |
| ·重组磷脂酶 A_1的亲和纯化 | 第43-44页 |
| ·最适反应温度和热稳定性 | 第44-45页 |
| ·最适反应 pH 和 pH 稳定性 | 第45-46页 |
| ·金属离子和化学试剂对重组磷脂酶 A_1活力的影响 | 第46-47页 |
| ·重组磷脂酶的底物特异性 | 第47-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56页 |
