| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-37页 |
| ·酶法生产7-氨基头孢烷酸 | 第13-29页 |
| ·D-氨基酸氧化酶 | 第13-15页 |
| ·DAAO来源和生物学作用 | 第15页 |
| ·DAAO基本性质 | 第15-16页 |
| ·DAAO底物特异性 | 第16页 |
| ·DAAO热稳定性和pH稳定性 | 第16-17页 |
| ·DAAO基因克隆和表达 | 第17-19页 |
| ·DAAO蛋白质结构研究 | 第19-23页 |
| ·DAAO产业化应用 | 第23-24页 |
| ·头孢菌素酰化酶 | 第24-29页 |
| ·酶法转化CPC生成7-ACA | 第29-30页 |
| ·展望 | 第30-37页 |
| 第2章 三角酵母D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中表达纯化及固定化 | 第37-55页 |
| ·前言 | 第37-38页 |
| ·材料与方法 | 第38-47页 |
| ·菌种、质粒、工具酶和化学试剂 | 第38页 |
| ·配置培养基 | 第38-40页 |
| ·整合载体构建 | 第40页 |
| ·重组质粒转化与筛选 | 第40-41页 |
| ·DAAO高表达转化子筛选 | 第41-43页 |
| ·四种重组毕赤酵母菌株发酵 | 第43-44页 |
| ·酶活力测定 | 第44-45页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第45页 |
| ·亲和载体制备方法 | 第45-46页 |
| ·重组HDAAO纯化和固定化 | 第46页 |
| ·头孢菌素C转化反应 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-51页 |
| ·重组菌株筛选 | 第47页 |
| ·重组菌株在5L发酵罐中培养 | 第47-50页 |
| ·HDAAO纯化和固定化 | 第50页 |
| ·固定化HDAAO转化CPC | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-55页 |
| 第3章 透明颤菌血红蛋白增强D-氨基酸氧化酶催化活性 | 第55-76页 |
| ·前言 | 第55-60页 |
| ·VHb的结构及特性 | 第55-56页 |
| ·VHb基因克隆、表达与调控 | 第56-58页 |
| ·VHb的生理功能 | 第58-60页 |
| ·材料与方法 | 第60-65页 |
| ·工具酶和化学试剂 | 第60页 |
| ·重组质粒和菌株构建 | 第60-62页 |
| ·基因工程菌发酵 | 第62-63页 |
| ·DAAO活力测定 | 第63页 |
| ·过氧化氢酶活力测定 | 第63-64页 |
| ·酯酶活力测定方法 | 第64页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第64页 |
| ·亲和纯化 | 第64-65页 |
| ·固定化酶制备和CPC转化 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-71页 |
| ·溶氧对VHb,HDAAO和HVDAAO重组蛋白表达的影响 | 第65-66页 |
| ·固定化VHb,HDAAO和HVDAAO | 第66-68页 |
| ·VHb提高HDAAO对CPC的催化效率 | 第68-70页 |
| ·HDAAO和融合蛋白HVDAAO的固定化酶活力比较 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-76页 |
| 第4章 一步纯化固定化GL-7-ACA酰化酶 | 第76-93页 |
| ·前言 | 第76-77页 |
| ·实验材料与方法 | 第77-84页 |
| ·质粒,菌株,工具酶和试剂 | 第77-78页 |
| ·酰化酶重组质粒构建 | 第78-79页 |
| ·培养基 | 第79页 |
| ·重组菌株发酵 | 第79-80页 |
| ·GLA粗酶液提取 | 第80页 |
| ·FP-IDA-Ni2+载体制备 | 第80-82页 |
| ·GLA固定化和纯化 | 第82页 |
| ·比色法测定GLA活力 | 第82-83页 |
| ·HPLC测定GLA活力 | 第83页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第83页 |
| ·pH、温度和H2O2对固定化GLA稳定性影响 | 第83-84页 |
| ·结果 | 第84-89页 |
| ·四种GLA表达菌株构建 | 第84页 |
| ·GLA重组表达 | 第84-85页 |
| ·GLA固定化 | 第85-86页 |
| ·GLA的单步纯化 | 第86页 |
| ·温度、pH和过氧化氢对固定化酶稳定性影响 | 第86-89页 |
| ·固定化GLA连续转化 | 第89页 |
| ·讨论 | 第89-93页 |
| 第5章 重组DAAO和GLA的表达和固定化 | 第93-104页 |
| ·前言 | 第93-94页 |
| ·材料与方法 | 第94-96页 |
| ·固定化酶载体和缓冲液 | 第94-95页 |
| ·TvDAAO纯化 | 第95页 |
| ·GLA纯化 | 第95页 |
| ·TvDAAO固定化方法 | 第95-96页 |
| ·结果与讨论 | 第96-104页 |
| ·重组菌株表达TvDAAO | 第96-97页 |
| ·固定化TvDAAO连续转化 | 第97-98页 |
| ·构建重组菌株pETRD/BL21(DE3)和pVRD/BL21(DE3) | 第98-99页 |
| ·重组RgDAAO和VRDAAO表达纯化 | 第99-101页 |
| ·固定化VRDAAO连续转化 | 第101-102页 |
| ·固定化GLA连续转化 | 第102-104页 |
| 论文总结 | 第104-109页 |
| 论文研究结论 | 第105-106页 |
| 结论一 | 第105页 |
| 结论二 | 第105页 |
| 结论三 | 第105-106页 |
| 论文创新点与不足之处 | 第106页 |
| 创新点一 | 第106页 |
| 创新点一 | 第106页 |
| 论文不足之处 | 第106页 |
| 论文后续工作和展望 | 第106-109页 |
| 展望 | 第107-109页 |
| 博士研究生期间己发表和待发表的论文及专利 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
