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解淀粉芽孢杆菌LY-1的生物学及其对龙眼果实采后病害的控制机理研究

摘要第17-20页
Abstract第20-22页
第一章 文献综述第23-42页
    1 采后果蔬的保鲜方法第23-25页
        1.1 物理保鲜方法第23-24页
        1.2 化学保鲜方法第24-25页
        1.3 生物保鲜方法第25页
    2 生防菌的研究进展第25-42页
        2.1 生防菌的种类第25-28页
            2.1.1 真菌第25-26页
            2.1.2 细菌第26-27页
            2.1.3 病毒第27页
            2.1.4 放线菌第27-28页
        2.2 生防菌的作用机制第28-42页
            2.2.1 分泌抗菌物质第28-38页
            2.2.2 重寄生第38页
            2.2.3 竞争第38-39页
            2.2.4 诱导植物产生抗病性第39-40页
            2.2.5 对植物的促生作用第40-42页
第二章 龙眼保鲜内生拮抗菌的筛选与鉴定第42-58页
    1 材料与方法第42-51页
        1.1 材料第42-43页
            1.1.1 样品来源第42页
            1.1.2 供试病原菌第42页
            1.1.3 培养基第42页
            1.1.4 参比菌株第42-43页
            1.1.5 生理生化鉴定试剂第43页
            1.1.6 分子生物学试剂第43页
            1.1.7 实验仪器第43页
        1.2 筛选方法第43-45页
            1.2.1 菌株的分离纯化第44页
            1.2.2 筛选第44页
            1.2.3 菌种保存第44页
            1.2.4 LY-1的抑菌谱分析第44-45页
        1.3 LY-1的形态观察和生理生化测定第45-48页
            1.3.1 菌落形态观察第45页
            1.3.2 液体培养情况观察第45页
            1.3.3 革兰氏染色第45-46页
            1.3.4 芽孢染色第46页
            1.3.5 运动性观察第46页
            1.3.6 透射电镜观察第46页
            1.3.7 LY-1的生理生化指标测定第46-48页
        1.4 LY-1的16S rDNA序列分析第48-51页
            1.4.1 菌株的纯化第48页
            1.4.2 DNA的提取第48-49页
            1.4.3 DNA纯度和浓度检测第49页
            1.4.4 PCR扩增第49页
            1.4.5 扩增产物测序第49-50页
            1.4.6 Genbank比对第50页
            1.4.7 枯草芽孢杆菌(B. subtilis)与解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliquefaciens)的区分第50页
            1.4.8 特异引物Bam、Bsu和Multiplex的PCR扩增第50-51页
    2 结果与分析第51-56页
        2.1 拮抗菌的分离筛选结果第51-52页
        2.2 菌株LY-1的抑菌谱第52页
        2.3 菌株LY-1的形态特征第52-53页
        2.4 菌株LY-1的生理生化测定结果第53-54页
        2.5 菌株LY-1的分子生物学鉴定结果第54-56页
            2.5.1 菌株LY-1的16S rDNA核苷酸序列比对结果第54-56页
            2.5.2 特异引物的扩增结果第56页
    3 讨论第56-57页
    4 小结第57-58页
第三章 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1的发酵条件第58-72页
    1 材料与方法第58-61页
        1.1 供试材料第58页
            1.1.1 供试菌株第58页
            1.1.2 培养基第58页
            1.1.3 主要仪器设备第58页
        1.2 试验方法第58-61页
            1.2.1 种子液的制备第58-59页
            1.2.2 病原菌的培养第59页
            1.2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1发酵液的抑菌率测定第59页
            1.2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1发酵温度的筛选第59页
            1.2.5 碳素营养对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第59页
            1.2.6 氮素营养对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第59页
            1.2.7 碳、氮组合对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第59页
            1.2.8 装液量对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第59-60页
            1.2.9 初始pH值对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第60页
            1.2.10 接种量对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第60页
            1.2.11 正交试验设计第60页
            1.2.12 正交试验的验证第60页
            1.2.13 金属盐、表面活性剂和有机物对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第60页
            1.2.14 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1的发酵曲线和代谢曲线的绘制第60-61页
    2 结果与分析第61-70页
        2.1 温度对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第61页
        2.2 碳素营养对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第61-62页
        2.3 氮素营养对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第62-63页
        2.4 碳氮组合对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第63页
        2.5 装液量对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第63-64页
        2.6 初始pH对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第64-65页
            2.6.1 玉米粉培养基灭菌前后及发酵过程pH值的变化第64-65页
            2.6.2 pH对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第65页
        2.7 接种量对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第65-66页
        2.8 正交试验及验证结果分析第66-68页
        2.9 金属盐、表面活性剂和有机物对生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌率的影响第68页
        2.10 发酵曲线第68-70页
    3 讨论第70-71页
    4 小结第71-72页
第四章 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌粗提物的分离方法第72-80页
    1 材料与方法第72-75页
        1.1 供试材料第72-73页
            1.1.1 供试菌株第72页
            1.1.2 培养基第72页
            1.1.3 主要试剂第72页
            1.1.4 主要仪器设备第72-73页
        1.2 试验方法第73-75页
            1.2.1 发酵液的制备第73页
            1.2.2 抑菌活性的测定第73页
            1.2.3 有机溶剂沉淀法第73页
            1.2.4 盐析沉淀提取法第73-74页
            1.2.5 大孔树脂吸附法第74页
            1.2.6 酸碱沉淀法第74页
            1.2.7 提取方法的选择第74-75页
            1.2.8 全波长扫描第75页
    2 结果与分析第75-78页
        2.1 有机溶剂沉淀法第75页
        2.2 盐析沉淀提取法第75-76页
        2.3 大孔树脂吸附法第76页
        2.4 酸碱沉淀法第76-77页
        2.5 粗提物的抑菌效果第77-78页
        2.6 全波长扫描图第78页
    3 讨论第78-79页
    4 小结第79-80页
第五章 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌物质的理化特性研究第80-85页
    1 材料与方法第80-82页
        1.1 试验材料第80页
            1.1.1 供试菌株第80页
            1.1.2 培养基第80页
            1.1.3 试剂第80页
            1.1.4 仪器设备第80页
        1.2 试验方法第80-82页
            1.2.1 菌株发酵液的制备第80页
            1.2.2 抑菌活性物质的分离第80-81页
            1.2.3 抑菌活性的测定第81页
            1.2.4 抗真菌活性物质对热稳定性的研究第81页
            1.2.5 抗真菌活性物质对pH稳定性的研究第81页
            1.2.6 抗真菌活性物质对紫外线稳定性的研究第81页
            1.2.7 抗真菌活性物质对蛋白酶稳定性的研究第81-82页
    2 结果与分析第82-84页
        2.1 抗真菌活性物质对热稳定性的研究第82页
        2.2 抗真菌活性物质对pH稳定性的研究第82-83页
        2.3 抗真菌活性物质对紫外线稳定性的研究第83页
        2.4 LY-1抑菌活性物质对蛋白酶的稳定性第83-84页
    3 讨论第84页
    4 小结第84-85页
第六章 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1的抑菌机理研究第85-92页
    1 材料与方法第85-88页
        1.1 试验材料第85-86页
            1.1.1 供试菌株第85页
            1.1.2 培养基第85页
            1.1.3 试剂第85页
            1.1.4 仪器设备第85-86页
        1.2 试验方法第86-88页
            1.2.1 抑菌物质的提取第86页
            1.2.2 病原菌孢子悬浮液的制备第86页
            1.2.3 抑菌粗提物对病原孢子萌发的影响第86页
            1.2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对菌丝的致畸作用第86页
            1.2.5 抑菌粗提物对病原孢外酶的影响第86-88页
    2 结果与分析第88-90页
        2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌粗提物对病原孢子萌发的影响第88页
        2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对病原菌丝的致畸作用第88-89页
        2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1抑菌粗提物对病原细胞壁降解酶活性的影响第89-90页
    3 讨论第90页
    4 小结第90-92页
第七章 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY1对采后龙眼果实的保鲜及其作用机理研究第92-124页
    第一节 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对采后龙眼果实的保鲜效果第92-97页
        1 材料与方法第92-93页
            1.1 材料第92页
            1.2 材料处理方法第92-93页
            1.3 测定指标和方法第93页
                1.3.1 果实病情指数的测定第93页
                1.3.2 果皮褐变指数的测定第93页
                1.3.3 果实呼吸强度的测定第93页
            1.4 统计分析第93页
        2 结果与分析第93-95页
            2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果实病情指数的影响第93-94页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮褐变指数的影响第94-95页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果实呼吸强度的影响第95页
        3 讨论第95-96页
        4 小结第96-97页
    第二节 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对采后龙眼果实果皮活性氧代谢的影响第97-109页
        1 材料与方法第97-100页
            1.1 材料第97页
            1.2 材料处理方法第97页
            1.3 测定项目及方法第97-100页
                1.3.1 果皮超氧阴离子(O_2~(-·))产生速率的测定第97页
                1.3.2 果皮超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定第97-98页
                1.3.3 果皮过氧化氢酶(CAT)活性的测定第98页
                1.3.4 果皮抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的测定第98-99页
                1.3.5 果皮抗坏血酸(AsA)含量的测定第99页
                1.3.6 果皮还原型谷胱甘肽(GSH)含量的测定第99页
                1.3.7 果皮类黄酮含量的测定第99页
                1.3.8 果皮细胞膜透性的测定第99页
                1.3.9 果皮丙二醛(MDA)含量的测定第99页
                1.3.10 果皮脂氧合酶(LOX)活性的测定第99-100页
                1.3.11 果皮蛋白质含量的测定第100页
            1.4 统计分析第100页
        2 结果与分析第100-107页
            2.1 LY-1对龙眼果皮超氧阴离子(O_2~(-·))产生速率的影响第100-101页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响第101-102页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮过氧化氧酶(CAT)活性的影响第102页
            2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的影响第102-103页
            2.5 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮抗坏血酸(AsA)含量的影响第103页
            2.6 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮还原型谷胱甘肽(GSH)含量的影响第103-104页
            2.7 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮类黄酮含量的影响第104-105页
            2.8 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮细胞膜透性变化的影响第105-106页
            2.9 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮丙二醛(MDA)含量的影响第106页
            2.10 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮脂氧合酶(LOX)活性的影响第106-107页
        3 讨论第107-108页
        4 小结第108-109页
    第三节 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对采后龙眼果实果皮褐变和酚类物质代谢的影响第109-116页
        1 材料与方法第109-110页
            1.1 材料第109页
            1.2 材料处理第109页
            1.3 指标测定方法第109-110页
                1.3.1 果实病情指数的测定第109页
                1.3.2 果皮褐变指数的测定第109页
                1.3.3 果皮总酚含量的测定第109页
                1.3.4 果皮多酚氧化酶(PPO)活性的测定第109-110页
                1.3.5 果皮细胞膜透性的测定第110页
                1.3.6 果皮蛋白质含量的测定第110页
            1.4 统计分析第110页
        2 结果与分析第110-114页
            2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果实病情指数的影响第110-111页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮褐变指数的影响第111-112页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮总酚含量的影响第112页
            2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮多酚氧化酶(PPO)活性的影响第112-113页
            2.5 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮细胞膜透性的影响第113-114页
        3 讨论第114-115页
        4 小结第115-116页
    第四节 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY1对龙眼果实采后抗病性的影响第116-124页
        1 材料与方法第116-118页
            1.1 材料第116页
            1.2 材料处理方法第116页
            1.3 测定项目及方法第116-118页
                1.3.1 果实病情指数的测定第116页
                1.3.2 果皮苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的测定第116页
                1.3.3 果皮过氧化物酶(POD)活性的测定第116-117页
                1.3.4 果皮木质素含量的测定第117页
                1.3.5 果皮几丁质酶(CHI)活性的测定第117页
                1.3.6 果皮β-1,3-葡聚糖酶(GLU)活性的测定第117页
                1.3.7 果皮蛋白质含量的测定第117-118页
            1.4 统计分析第118页
        2 结果与分析第118-122页
            2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果实病情指数的影响第118页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响第118-119页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮过氧化物酶(POD)活性的影响第119-120页
            2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮木质素含量的影响第120页
            2.5 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮几丁质酶(CHI)活性的影响第120-121页
            2.6 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼果皮β-1,3-葡聚糖酶(GLU)活性的影响第121-122页
        3 讨论第122-123页
        4 小结第123-124页
第八章 解淀粉芽孢杆菌LY-1对龙眼拟茎点霉菌导致采后龙眼果实腐烂的控制及其机理研究第124-152页
    第一节 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果实保鲜效果的影响第124-129页
        1 材料与方法第124-125页
            1.1 材料第124页
            1.2 材料处理方法第124-125页
            1.3 测定指标和方法第125页
                1.3.1 果实病情指数的测定第125页
                1.3.2 果皮褐变度的测定第125页
                1.3.3 果实呼吸强度的测定第125页
            1.4 统计分析第125页
        2 结果与分析第125-127页
            2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果实病情指数的影响第125-126页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮褐变度的影响第126页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果实呼吸强度的影响第126-127页
        3 讨论第127-128页
        4 小结第128-129页
    第二节 解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果实果皮活性氧代谢的影响第129-139页
        1 材料与方法第129-130页
            1.1 材料第129页
            1.2 材料处理方法第129页
            1.3 测定项目及方法第129-130页
                1.3.1 果皮超氧阴离子(O_2~(-·))产生速率的测定第129页
                1.3.2 果皮超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定第129页
                1.3.3 果皮过氧化氢酶(CAT)活性的测定第129页
                1.3.4 果皮抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的测定第129页
                1.3.5 果皮抗坏血酸(AsA)含量的测定第129页
                1.3.6 果皮还原型谷胱甘肽(GSH)含量的测定第129-130页
                1.3.7 果皮类黄酮含量的测定第130页
                1.3.8 果皮细胞膜透性的测定第130页
                1.3.9 果皮丙二醛(MDA)含量的测定第130页
                1.3.10 果皮脂氧合酶(LOX)活性的测定第130页
                1.3.11 果皮蛋白质含量的测定第130页
            1.4 统计分析第130页
        2 结果与分析第130-137页
            2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮O_2~(-·)产生速率的影响第130-131页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮SOD活性的影响第131页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮CAT活性的影响第131-132页
            2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮APX活性的影响第132-133页
            2.5 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮AsA含量的影响第133-134页
            2.6 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮GSH含量的影响第134页
            2.7 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮类黄酮含量的影响第134-135页
            2.8 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮细胞膜透性变化的影响第135-136页
            2.9 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮MDA含量的影响第136-137页
            2.10 LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮LOX活性的影响第137页
        3 讨论第137-138页
        4 小结第138-139页
    第三节 解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮褐变和酚类物质代谢的影响第139-145页
        1 材料与方法第139-140页
            1.1 材料第139页
            1.2 材料处理第139页
            1.3 测定指标和方法第139页
                1.3.1 果实病情指数的测定第139页
                1.3.2 果皮褐变指数的测定第139页
                1.3.3 果皮总酚含量的测定第139页
                1.3.4 果皮多酚氧化酶(PPO)活性的测定第139页
                1.3.5 果皮细胞膜透性的测定第139页
                1.3.6 果皮蛋白质含量的测定第139页
            1.4 统计分析第139-140页
        2 结果与分析第140-143页
            2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果实病情指数的影响第140页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮褐变指数的影响第140-141页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮总酚含量的影响第141-142页
            2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮PPO活性的影响第142页
            2.5 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮细胞膜透性的影响第142-143页
        3 讨论第143-144页
        4 小结第144-145页
    第四节 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果实采后抗病性的影响第145-152页
        1 材料与方法第145-146页
            1.1 材料第145页
            1.2 材料处理方法第145页
            1.3 测定项目及方法第145-146页
                1.3.1 果实病情指数的测定第145页
                1.3.2 果皮苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的测定第145页
                1.3.3 果皮过氧化物酶(POD)活性的测定第145页
                1.3.4 果皮木质素含量的测定第145页
                1.3.5 果皮几丁质酶(CHI)活性的测定第145页
                1.3.6 果皮β-1,3-葡聚糖酶(GLU)活性的测定第145页
                1.3.7 果皮蛋白质含量的测定第145-146页
            1.4 统计分析第146页
        2 结果与分析第146-150页
            2.1 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果实病情指数的影响第146页
            2.2 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮PAL活性的影响第146-147页
            2.3 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮POD活性的影响第147-148页
            2.4 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮木质素含量的影响第148-149页
            2.5 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮CHI活性的影响第149页
            2.6 生防菌解淀粉芽孢杆菌LY-1对接种龙眼拟茎点霉菌后龙眼果皮GLU活性的影响第149-150页
        3 讨论第150-151页
        4 小结第151-152页
第九章 研究结论与展望第152-155页
    1 研究结论第152-154页
    2 研究展望第154-155页
附录Ⅰ 缩略词中英文对照表第155-157页
附录Ⅱ 培养基配方第157-158页
参考文献第158-171页
致谢第171-172页
攻读博士学位期间发表的文章第172页

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