| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 脂肪酶的定义及简介 | 第14页 |
| 1.2 脂肪酶的来源和结构 | 第14-15页 |
| 1.3 脂肪酶的催化机理 | 第15-16页 |
| 1.4 脂肪酶的分离纯化 | 第16-19页 |
| 1.4.1 微生物脂肪酶的预分离 | 第16-17页 |
| 1.4.2 脂肪酶的纯化方法 | 第17-19页 |
| 1.5 脂肪酶的固定化方法 | 第19-20页 |
| 1.6 脂肪酶的酶学性质研究 | 第20-22页 |
| 1.7 选题意义 | 第22页 |
| 1.8 研究思路及技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 米曲霉胞内脂肪酶的分离纯化 | 第24-40页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料 | 第24-26页 |
| 2.2.1 菌种 | 第24页 |
| 2.2.2 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第25页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.5 常用缓冲液 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 菌种培养 | 第26-27页 |
| 2.3.2 酶活力测定方法 | 第27-28页 |
| 2.3.3 考马斯亮蓝法测蛋白含量 | 第28-29页 |
| 2.3.3.1 标准曲线的制作 | 第28页 |
| 2.3.3.2 蛋白含量的测定 | 第28-29页 |
| 2.3.4 脂肪酶的分离纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.4.1 胞内酶的提取 | 第29页 |
| 2.3.4.2 硫酸铵初级沉淀 | 第29页 |
| 2.3.4.3 硫酸铵次级沉淀 | 第29页 |
| 2.3.4.4 透析 | 第29-30页 |
| 2.3.4.5 Octyl Sepharose FF疏水层析柱 | 第30页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第30-32页 |
| 2.3.5.1 常用溶液的配置 | 第30-31页 |
| 2.3.5.2 灌胶 | 第31页 |
| 2.3.5.3 上样 | 第31-32页 |
| 2.3.5.4 电泳 | 第32页 |
| 2.3.5.5 染色和脱色 | 第32页 |
| 2.3.6 Zymography试验 | 第32-33页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第33-39页 |
| 2.4.1 胞内酶的提取 | 第33页 |
| 2.4.2 硫酸铵沉淀 | 第33-35页 |
| 2.4.2.1 硫酸铵初级沉淀 | 第33-34页 |
| 2.4.2.2 硫酸铵次级沉淀 | 第34-35页 |
| 2.4.3 Octyl Sepharose FF疏水层析 | 第35-36页 |
| 2.4.4 脂肪酶的纯度鉴定和分子量测定 | 第36-37页 |
| 2.4.5 Zymography实验 | 第37-38页 |
| 2.4.6 脂肪酶的分离纯化结果 | 第38-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 米曲霉胞内脂肪酶的酶学性质研究 | 第40-54页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.3.1 脂肪酶活力测定(滴定法) | 第41-42页 |
| 3.3.1.1 活力测定时的试剂配制 | 第41-42页 |
| 3.3.1.2 脂肪酶活力测定 | 第42页 |
| 3.3.2 脂肪酶活力测定方法(分光光度法) | 第42-43页 |
| 3.3.3 脂肪酶酶学性质研究 | 第43-45页 |
| 3.3.3.1 温度对酶活及稳定性的影响 | 第43页 |
| 3.3.3.2 pH对酶活力及稳定性的影响 | 第43页 |
| 3.3.3.3 金属离子对酶活力的影响 | 第43页 |
| 3.3.3.4 表面活性剂及抑制剂对酶活力的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3.5 有机试剂对酶活力的影响 | 第44页 |
| 3.3.3.6 脂肪酶的底物特异性研究 | 第44-45页 |
| 3.3.3.7 脂肪酶动力学常数的测定 | 第45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-52页 |
| 3.4.1 温度对酶活和稳定性的影响 | 第45-47页 |
| 3.4.2 pH对酶活力和稳定性的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.3 金属离子对酶活力的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.4 表面活性剂及抑制剂对酶活的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.5 有机溶剂对酶活力的影响 | 第50页 |
| 3.4.6 脂肪酶的底物特异性研究 | 第50-52页 |
| 3.4.7 脂肪酶动力学常数的测定 | 第52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 脂肪酶的固定化及在对羟基苯氧丙酸乙酯手性拆分中的应用 | 第54-69页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 材料 | 第54-56页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第55-56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-61页 |
| 4.3.1 酶活力测定 | 第56页 |
| 4.3.2 游离酶的固定化 | 第56-59页 |
| 4.3.2.1 海藻酸钠包埋法 | 第56页 |
| 4.3.2.2 琼脂凝胶包埋法 | 第56-57页 |
| 4.3.2.3 聚乙烯醇-海藻酸钠包埋法 | 第57页 |
| 4.3.2.4 聚乙烯醇包埋 | 第57页 |
| 4.3.2.5 碳酸钙吸附法 | 第57页 |
| 4.3.2.6 硅藻土吸附法 | 第57-58页 |
| 4.3.2.7 离子交换树脂吸附 | 第58页 |
| 4.3.2.8 壳聚糖交联固定化 | 第58-59页 |
| 4.3.3 固定化条件的优化 | 第59页 |
| 4.3.4 对羟基苯氧丙酸乙酯(HPE)的拆分 | 第59-60页 |
| 4.3.4.1 HPE的合成 | 第59页 |
| 4.3.4.2 固定化酶的制备 | 第59页 |
| 4.3.4.3 HPE的拆分 | 第59-60页 |
| 4.3.5 影响拆分条件的研究 | 第60-61页 |
| 4.3.5.1 缓冲液pH对酶拆分的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.5.2 反应温度对酶拆分的影响 | 第61页 |
| 4.3.5.3 加酶量对拆分的影响 | 第61页 |
| 4.3.5.4 反应时间对酶拆分的影响 | 第61页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第61-67页 |
| 4.4.1 固定化方法的选择 | 第61-63页 |
| 4.4.2 酶浓度对固定化的影响 | 第63页 |
| 4.4.3 温度对固定化的影响 | 第63-64页 |
| 4.4.4 时间对固定化的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.5 缓冲液pH对固定化酶拆分HPE的影响 | 第65页 |
| 4.4.6 反应温度对固定化酶拆分HPE的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.7 加酶量对拆分的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.8 反应时间对固定化酶拆分HPE的影响 | 第67页 |
| 4.5 本章小结 | 第67-69页 |
| 第五章 结论与展望 | 第69-72页 |
| 5.1 结论 | 第69-70页 |
| 5.2 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
