摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
0 前言 | 第16-34页 |
0.1 副溶血弧菌的简介 | 第16-19页 |
0.1.1 副溶血弧菌的生理特性 | 第16-17页 |
0.1.2 副溶血弧菌的致病性 | 第17页 |
0.1.3 副溶血弧菌的致病因子 | 第17-19页 |
0.1.3.1 溶血毒素 | 第18-19页 |
0.1.3.2 尿素酶 | 第19页 |
0.1.3.3 其他致病因子(黏附因子、侵袭力和蛋白酶) | 第19页 |
0.2 副溶血弧菌的检测技术 | 第19-24页 |
0.2.1 传统培养方法 | 第20-21页 |
0.2.1.1 国家标准检测方法 | 第20页 |
0.2.1.2 最大可能数法(MPN) | 第20页 |
0.2.1.3 神奈川溶血试验(KP试验) | 第20-21页 |
0.2.2 分子生物学方法 | 第21-23页 |
0.2.2.1 基因探针检测 | 第21页 |
0.2.2.2 PCR技术 | 第21-23页 |
0.2.2.3 基因芯片 | 第23页 |
0.2.3 免疫学检测技术 | 第23-24页 |
0.2.3.1 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第23-24页 |
0.2.3.2 免疫荧光抗体技术 | 第24页 |
0.2.3.3 免疫胶体金技术 | 第24页 |
0.3 脂肪酸甲酯(FAME)谱图分析方法 | 第24-28页 |
0.3.1 原理 | 第24-25页 |
0.3.2 方法 | 第25页 |
0.3.3 应用 | 第25-28页 |
0.3.3.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 | 第25-26页 |
0.3.3.2 FAME图谱分析方法在微生物多样性分析中的应用 | 第26-27页 |
0.3.3.3 脂肪酸标记在海洋食物网研究中的应用 | 第27-28页 |
0.4 指纹图谱分析的方法 | 第28-31页 |
0.4.1 指纹图谱的概述 | 第28页 |
0.4.2 指纹图谱数据处理方法 | 第28-31页 |
0.4.2.1 直接分析比较法 | 第28页 |
0.4.2.2 量化数据比较法 | 第28-29页 |
0.4.2.3 化学模式识别法 | 第29-31页 |
0.5 立题背景、意义及本课题研究内容 | 第31-34页 |
0.5.1 立题背景、意义 | 第31-32页 |
0.5.2 本课题研究内容 | 第32-34页 |
1 菌种的筛选、分离和鉴定 | 第34-40页 |
引言 | 第34页 |
1.1 实验材料 | 第34-35页 |
1.1.1 实验菌种和培养基 | 第34-35页 |
1.1.2 主要试剂 | 第35页 |
1.1.3 主要仪器 | 第35页 |
1.2 实验方法 | 第35-37页 |
1.2.1 TCBS培养基的平板筛选 | 第35页 |
1.2.2 2216E培养基的平板分离、纯化及保藏 | 第35页 |
1.2.3 菌株的PCR扩增 | 第35-37页 |
1.2.3.1 菌株的液体培养 | 第35-36页 |
1.2.3.2 DNA的提取 | 第36页 |
1.2.3.3 PCR反应体系和扩增参数 | 第36页 |
1.2.3.4 PCR扩增产物的序列分析 | 第36-37页 |
1.3 结果与讨论 | 第37-39页 |
1.3.1 海水筛选菌株结果 | 第37页 |
1.3.2 PCR扩增产物的检测 | 第37页 |
1.3.3 序列分析和进化树的构建 | 第37-39页 |
1.4 本章小结 | 第39-40页 |
2 脂肪酸衍生化条件的研究 | 第40-51页 |
引言 | 第40页 |
2.1 实验材料 | 第40-41页 |
2.1.1 实验菌种和培养基 | 第40页 |
2.1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
2.1.3 主要仪器 | 第41页 |
2.2 实验方法 | 第41-43页 |
2.2.1 菌株的平板活化 | 第41页 |
2.2.2 种子液的制备 | 第41页 |
2.2.3 菌株的液体培养 | 第41页 |
2.2.4 菌体的离心收集和干燥 | 第41-42页 |
2.2.5 脂肪酸衍生化条件 | 第42页 |
2.2.6 气相色谱和质谱条件 | 第42-43页 |
2.2.7 结果分析 | 第43页 |
2.3 结果与讨论 | 第43-50页 |
2.3.1 V.parahaemolyticus VP-X-3脂肪酸组成的气相色谱和质谱分析 | 第43-45页 |
2.3.2 脂肪酸衍生化条件对色谱峰数量的影响 | 第45页 |
2.3.3 脂肪酸衍生化条件对色谱峰高的影响 | 第45-48页 |
2.3.4 脂肪酸衍生化条件对脂肪酸百分含量的影响 | 第48-50页 |
2.4 本章小结 | 第50-51页 |
3 不同环境条件下副溶血弧菌脂肪酸组成的研究 | 第51-64页 |
引言 | 第51页 |
3.1 实验材料 | 第51-52页 |
3.1.1 实验菌种和培养基 | 第51页 |
3.1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
3.1.3 主要仪器 | 第52页 |
3.2 实验方法 | 第52-54页 |
3.2.1 菌株的平板活化 | 第52页 |
3.2.2 种子液的制备 | 第52页 |
3.2.3 不同环境因素对 V. parahaemolyticus 脂肪酸组成的影响 | 第52-53页 |
3.2.3.1 生长温度的影响 | 第52页 |
3.2.3.2 培养基pH的影响 | 第52-53页 |
3.2.3.3 培养时间的影响 | 第53页 |
3.2.3.4 4°C低温环境的影响 | 第53页 |
3.2.4 脂肪酸的皂化和甲酯化 | 第53页 |
3.2.5 气相色谱条件 | 第53-54页 |
3.3 结果与讨论 | 第54-63页 |
3.3.1 生长温度对 V.parahaemolyticus 脂肪酸组成的影响 | 第54-56页 |
3.3.2 培养基pH对 V.parahaemolyticus 脂肪酸组成的影响 | 第56-58页 |
3.3.3 培养时间对 V.parahaemolyticus 脂肪酸组成的影响 | 第58-60页 |
3.3.4 4℃低温环境对 V.parahaemolyticus 的影响 | 第60-63页 |
3.3.4.1 活菌平板计数 | 第60-61页 |
3.3.4.2 4℃低温对脂肪酸组成的影响 | 第61-63页 |
3.5 本章小结 | 第63-64页 |
4 副溶血弧菌脂肪酸指纹图谱的建立 | 第64-78页 |
引言 | 第64页 |
4.1 实验材料 | 第64-65页 |
4.1.1 实验菌种和培养基 | 第64-65页 |
4.1.2 实验试剂 | 第65页 |
4.1.3 主要仪器 | 第65页 |
4.2 实验方法 | 第65-67页 |
4.2.1 菌株的平板活化 | 第65页 |
4.2.2 种子液的制备 | 第65-66页 |
4.2.3 菌株的液体培养 | 第66页 |
4.2.4 菌体的收集和干燥 | 第66页 |
4.2.5 脂肪酸的皂化和甲酯化 | 第66页 |
4.2.6 气相色谱条件 | 第66页 |
4.2.7 标准指纹图谱的建立 | 第66-67页 |
4.2.7.1 副溶血弧菌指纹图谱信息的采集 | 第66页 |
4.2.7.2 副溶血弧菌脂肪酸指纹图谱相似度的分析 | 第66-67页 |
4.2.7.3 主成分分析 | 第67页 |
4.3 结果与讨论 | 第67-76页 |
4.3.1 V.parahaemolyticus指纹图谱信息的采集及与其他细菌指纹图谱的比较 | 第67-73页 |
4.3.1.1 副溶血弧菌指纹图谱信息的采集 | 第67-70页 |
4.3.1.2 副溶血弧菌与不同种属海洋细菌脂肪酸组成上的差异比较 | 第70-73页 |
4.3.2 相似度的计算 | 第73-75页 |
4.3.3 主成分分析 | 第75-76页 |
4.4 本章小结 | 第76-78页 |
4.4.1 15株海洋细菌脂肪酸组成的分析 | 第76页 |
4.4.2 相似度的分析 | 第76-77页 |
4.4.3 主成分分析 | 第77-78页 |
结论 | 第78-82页 |
参考文献 | 第82-91页 |
展望 | 第91页 |
创新点 | 第91-92页 |
致谢 | 第92-93页 |
个人简历 | 第93-94页 |
硕士期间发表的学术论文 | 第94-95页 |