| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 纤维素 | 第11页 |
| 1.2 纤维素酶的组成 | 第11-12页 |
| 1.3 纤维素酶的作用机制 | 第12页 |
| 1.4 纤维素酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.5 米曲霉(Aspergillus oryzae) | 第13页 |
| 1.6 纤维素酶活性的测定方法 | 第13-19页 |
| 1.6.1 总酶活和单个酶酶活的测定 | 第14页 |
| 1.6.2 FPA(滤纸酶活):总纤维素酶活性 | 第14-16页 |
| 1.6.3 内切葡聚糖酶(EGs)活性: | 第16-17页 |
| 1.6.4 外切葡聚糖酶活性:微晶纤维素酶活性 | 第17-18页 |
| 1.6.5 β-葡萄糖苷酶活性测定 | 第18页 |
| 1.6.6 纤维素酶测定的新方法 | 第18-19页 |
| 1.7 纤维素酶的应用研究 | 第19-20页 |
| 1.7.1 在食品加工中的应用 | 第19-20页 |
| 1.7.2 在饲料工业中 | 第20页 |
| 1.7.3 其他方面 | 第20页 |
| 1.8 外切葡聚糖苷酶(CBH)的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.9 存在的问题 | 第21-23页 |
| 第二章 纤维素酶总酶活和单—酶活性测定方法的建立 | 第23-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23页 |
| 2.1.4 缓冲液和底物 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 米曲霉菌株培养 | 第24页 |
| 2.2.2 米曲霉菌株保藏 | 第24-25页 |
| 2.2.3 粗酶液的制备 | 第25页 |
| 2.2.4 蛋白质含量测定 | 第25页 |
| 2.2.5 底物平板法鉴定纤维素酶 | 第25-26页 |
| 2.2.6 纤维素酶活性测定 | 第26-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-33页 |
| 2.3.1 底物平板法鉴定纤维素酶 | 第28-29页 |
| 2.3.2 标准曲线和回归方程 | 第29-33页 |
| 2.4 本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 六株米曲霉产纤维素酶的性质研究 | 第34-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 菌种 | 第34页 |
| 3.1.2 培养基 | 第34页 |
| 3.1.3 诱导物 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 菌落形态观察 | 第35页 |
| 3.2.2 活性比较 | 第35页 |
| 3.2.3 发酵液组合 | 第35页 |
| 3.2.4 发酵pH曲线 | 第35页 |
| 3.2.5 发酵产酶时间曲线 | 第35页 |
| 3.2.6 最佳诱导物 | 第35-36页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第36-42页 |
| 3.3.1 菌落形态观察 | 第36页 |
| 3.3.2 六株菌在DPY培养基中的FPA比较 | 第36-37页 |
| 3.3.3 六种发酵液两两等比例混合 | 第37-38页 |
| 3.3.4 三种酶液等比例混合 | 第38-39页 |
| 3.3.5 六株菌分别在四种不同的发酵培养基中发酵 | 第39-40页 |
| 3.3.6 发酵pH曲线 | 第40-41页 |
| 3.3.7 发酵产酶时间曲线 | 第41页 |
| 3.3.8 最佳诱导物 | 第41-42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-44页 |
| 第四章 米曲霉发酵产纤维素酶的分离纯化 | 第44-61页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第45-47页 |
| 4.1.1 菌株 | 第45页 |
| 4.1.2 培养基和试剂 | 第45-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-52页 |
| 4.2.1 活性测定方法 | 第47页 |
| 4.2.2 蛋白含量测定 | 第47页 |
| 4.2.3 粗酶液制备 | 第47页 |
| 4.2.4 硫酸铵分级沉淀(Fraction precipitation by ammonium sulfate) | 第47-48页 |
| 4.2.5 离子交换层析 | 第48-49页 |
| 4.2.6 Sephadex G-75凝胶过滤层析 | 第49-50页 |
| 4.2.7 层析样品纯度测定 | 第50-51页 |
| 4.2.8 从PAGE凝胶中回收蛋白质 | 第51页 |
| 4.2.9 SDS-PAGE凝胶的活性染色 | 第51-52页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第52-60页 |
| 4.3.1 硫酸铵分级沉淀 | 第52页 |
| 4.3.2 DEAE FF弱阴离子交换层析 | 第52-54页 |
| 4.3.3 从PAGE凝胶中回收蛋白质 | 第54-55页 |
| 4.3.4 SDS-PAGE凝胶的活性染色 | 第55-56页 |
| 4.3.5 Q Sepharose FF强阴离子交换层析 | 第56-58页 |
| 4.3.6 Sephadex G-75凝胶过滤层析 | 第58-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 绿色木霉和里氏木霉外切葡聚糖酶基因克隆 | 第61-74页 |
| 5.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 菌种和载体 | 第61页 |
| 5.1.2 工具酶和实验试剂 | 第61页 |
| 5.1.3 RNA提取用品 | 第61页 |
| 5.1.4 培养基 | 第61-62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-66页 |
| 5.2.1 绿色木霉总RNA的提取 | 第62-63页 |
| 5.2.2 绿色木霉和里氏木霉基因组的提取 | 第63页 |
| 5.2.3 外切纤维素酶基因的克隆 | 第63-65页 |
| 5.2.4 重组克隆载体的构建 | 第65页 |
| 5.2.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第65-66页 |
| 5.2.6 重组质粒的核苷酸序列分析 | 第66页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第66-73页 |
| 5.3.1 绿色木霉总RNA的提取 | 第66页 |
| 5.3.2 绿色木霉和里氏木霉基因组提取结果 | 第66-67页 |
| 5.3.3 两种木霉的三种基因的PCR扩增 | 第67-68页 |
| 5.3.4 菌落PCR鉴定 | 第68-69页 |
| 5.3.5 酶切鉴定 | 第69-70页 |
| 5.3.6 重组质粒的核苷酸序列鉴定 | 第70-73页 |
| 5.4 本章小结 | 第73-74页 |
| 第六章 总结与展望 | 第74-76页 |
| 6.1 总结 | 第74-75页 |
| 6.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第82页 |
