| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-14页 |
| ·课题的研究背景 | 第10-11页 |
| ·微生物蛋白酶的分类 | 第10页 |
| ·胶原蛋白与微生物胶原酶的简介 | 第10-11页 |
| ·课题的研究重点 | 第11-14页 |
| ·微生物胶原酶的应用概况 | 第11页 |
| ·本课题的研究技术路线 | 第11-12页 |
| ·本课题研究的技术革新 | 第12-14页 |
| 第二章 胶原酶产生菌的筛选与鉴定 | 第14-25页 |
| ·研究依据及意义 | 第14页 |
| ·研究内容 | 第14页 |
| ·实验材料 | 第14-16页 |
| ·菌种来源 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14-15页 |
| ·实验试剂 | 第15页 |
| ·实验仪器设备 | 第15-16页 |
| ·实验方法 | 第16-18页 |
| ·产酶菌株的筛选与分离纯化 | 第16页 |
| ·构建基于菌株 16Sr DNA全序列的系统发育树 | 第16页 |
| ·产酶菌株的碳源利用谱 | 第16页 |
| ·菌株的生理生化反应鉴定 | 第16-17页 |
| ·粗酶液的制备及蛋白水解活性检测 | 第17页 |
| ·利用凝胶酶谱及串联质谱技术对菌株所产蛋白酶的分析 | 第17-18页 |
| ·结果 | 第18-24页 |
| ·分离纯化后菌株的生长状况及其菌落形态 | 第18-19页 |
| ·菌株的分析与鉴定 | 第19-21页 |
| ·粗酶液的蛋白水解能力 | 第21-22页 |
| ·蜡样芽孢杆菌所产蛋白酶的鉴定 | 第22-24页 |
| ·讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 蜡样芽孢杆菌R75E所产胶原酶基因的鉴定及原核表达 | 第25-37页 |
| ·研究依据及意义 | 第25页 |
| ·研究内容 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌株及载体 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26页 |
| ·实验仪器设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·胶原酶基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·胶原酶的序列分析及结构预测 | 第28页 |
| ·构建胶原酶的原核表达载体 | 第28-29页 |
| ·胶原酶的诱导表达及纯化 | 第29-30页 |
| ·胶原酶的胶原酶谱电泳检测 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-35页 |
| ·蜡样芽孢杆菌R75E所产胶原酶的基因序列 | 第30-32页 |
| ·pET28a/Collagenase重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·重组胶原酶的结构分析 | 第33-34页 |
| ·重组胶原酶的诱导与表达 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 重组胶原酶ColR75E的酶学性质分析 | 第37-45页 |
| ·研究依据及意义 | 第37页 |
| ·研究内容 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·菌种来源 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·实验仪器设备 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·重组胶原酶ColR75E的比活力测定 | 第39-40页 |
| ·重组胶原酶ColR75E的最适温度及其热稳定性 | 第40页 |
| ·重组胶原酶ColR75E的最适pH及其酸碱稳定 | 第40页 |
| ·不同金属离子或蛋白酶抑制剂对ColR75E酶活性的影响 | 第40-41页 |
| ·ColR75E的酶动力学参数Km和Vmax的测定 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-43页 |
| ·重组ColR75E胶原蛋白酶的活性分析 | 第41页 |
| ·温度对ColR75E酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·pH对ColR75E酶活性的影响 | 第42页 |
| ·不同金属离子以及蛋白酶抑制剂对重组ColR75E胶原酶酶活性的影响 | 第42-43页 |
| ·重组ColR75E胶原酶酶动力学参数Km和Vmax的计算 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 总结与展望 | 第45-48页 |
| ·研究结论 | 第45页 |
| ·研究的创新点 | 第45-47页 |
| ·在胶原酶基因工程菌株开发技术上的进步 | 第45-46页 |
| ·在蛋白酶凝胶酶谱分析技术上的革新 | 第46-47页 |
| ·研究展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 发表论文、参加科研情况说明 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
