| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 0 前言 | 第14-49页 |
| ·核酸扩增技术的发展历史与研究现状 | 第14-18页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第14-17页 |
| ·连接酶链式反应 | 第17-18页 |
| ·等温核酸扩增方法的研究进展 | 第18-25页 |
| ·环介导等温扩增 | 第18-20页 |
| ·核酸序列依赖扩增 | 第20-21页 |
| ·链置换扩增 | 第21-22页 |
| ·等温多重取代扩增 | 第22-23页 |
| ·依赖解旋酶 DNA 等温扩增 | 第23-24页 |
| ·滚环扩增 | 第24-25页 |
| ·滚环扩增的研究进展与应用 | 第25-33页 |
| ·RCA 检测核酸序列 | 第25-30页 |
| ·RCA 进行全基因组扩增 | 第30-31页 |
| ·利用 RCA 检测单核苷酸多态性 | 第31-33页 |
| ·固相滚环扩增检测技术 | 第33-38页 |
| ·磁珠 | 第33-35页 |
| ·微阵列 | 第35-37页 |
| ·微流控芯片 | 第37-38页 |
| ·水产品中有害微生物的检测 | 第38-41页 |
| ·PCR 检测水产品中有害微生物 | 第38-39页 |
| ·免疫法检测水产品中有害微生物 | 第39-40页 |
| ·基因芯片检测水产品中有害微生物 | 第40-41页 |
| ·本论文研究意义 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 1. TC-RCA 等温 DNA 扩增方法的初探 | 第49-70页 |
| ·仪器与材料 | 第51-53页 |
| ·TC-RCA 扩增 PCR 产物酶切片段 | 第53-58页 |
| ·方法与步骤 | 第53-55页 |
| ·pUC-18 质粒的提取和 TspR I 酶切 | 第53页 |
| ·PCR 扩增质粒特定序列片段 | 第53-54页 |
| ·PCR 产物胶回收提取 | 第54页 |
| ·胶回收产物与提取质粒 TspR I 限制性内切酶酶切 | 第54页 |
| ·酶切模板连接反应 | 第54-55页 |
| ·RCA 反应 | 第55页 |
| ·RCA 产物 TspR I 再酶切 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-58页 |
| ·TC-RCA 优化接头扩增质粒酶切片段 | 第58-64页 |
| ·方法与步骤 | 第58-59页 |
| ·pUC-18 质粒 TspR I 酶切 | 第58页 |
| ·连接反应 | 第58页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第58-59页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-64页 |
| ·TC-RCA 在固相磁珠表面扩增质粒酶切片段 | 第64-68页 |
| ·方法与步骤 | 第64-66页 |
| ·负载接头的磁珠制备 | 第64页 |
| ·pUC-18 质粒 TspR I 酶切 | 第64-65页 |
| ·连接反应 | 第65页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第65页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第65-66页 |
| ·固相磁珠负载接头的稳定性 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-70页 |
| 2. 高背景核酸条件下 TC-RCA 扩增目的 DNA 序列 | 第70-91页 |
| ·仪器与材料 | 第71-73页 |
| ·T4 DNA 连接酶介导的从牡蛎基因组 DNA 中扩增质粒片段 | 第73-85页 |
| ·方法与步骤 | 第73-74页 |
| ·牡蛎基因组 DNA 的提取 | 第73页 |
| ·pUC-18 质粒混合牡蛎基因组 DNA TspR I 酶切 | 第73页 |
| ·连接反应 | 第73-74页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第74页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| ·Taq DNA 连接酶介导的从牡蛎基因组 DNA 中扩增质粒片段 | 第85-89页 |
| ·方法与步骤 | 第85-87页 |
| ·牡蛎基因组 DNA 的提取 | 第85页 |
| ·pUC-18 质粒混合牡蛎基因组 DNA TspR I 酶切 | 第85-86页 |
| ·连接(Ligation)反应 | 第86页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第86页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第86-87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| ·本章小结 | 第89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 3. 磁珠辅助 TC-RCA 扩增技术的研究 | 第91-132页 |
| ·仪器与材料 | 第91-94页 |
| ·磁珠辅助 Taq DNA 连接酶介导的 TC-RCA 扩增 | 第94-102页 |
| ·方法与步骤 | 第94-96页 |
| ·牡蛎基因组 DNA 的提取 | 第94页 |
| ·pUC-18 质粒混合牡蛎基因组 DNA TspR I 酶切 | 第94页 |
| ·连接反应 | 第94-95页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第95页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第95页 |
| ·PCR 在牡蛎基因组存在下扩增 pUC-18 质粒 | 第95-96页 |
| ·结果与讨论 | 第96-101页 |
| ·小结 | 第101-102页 |
| ·磁珠辅助 TC-RCA 扩增方法敏感度优化 | 第102-114页 |
| ·方法与步骤 | 第102-104页 |
| ·牡蛎基因组 DNA 的提取 | 第102页 |
| ·pUC-18 质粒混合牡蛎基因组 DNA TspR I 酶切 | 第102页 |
| ·连接反应 | 第102-103页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第103页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第103-104页 |
| ·结果与讨论 | 第104-113页 |
| ·本节小结 | 第113-114页 |
| ·磁珠辅助 TC-RCA 扩增方法效率的提升优化 | 第114-129页 |
| ·方法与步骤 | 第114-118页 |
| ·牡蛎基因组 DNA 的提取 | 第114页 |
| ·pUC-18 质粒混合牡蛎基因组 DNA TspR I 酶切 | 第114-115页 |
| ·连接反应 | 第115页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第115-116页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第116页 |
| ·SYBR Green I 染色 | 第116页 |
| ·Real-time 实时荧光定量系统进行 RT-RCA | 第116-118页 |
| ·结果与讨论 | 第118-128页 |
| ·小结 | 第128-129页 |
| ·本章小结 | 第129页 |
| 参考文献 | 第129-132页 |
| 4. 磁珠辅助 TC-RCA 检测水产品中的有害细菌 | 第132-152页 |
| ·仪器与材料 | 第133-135页 |
| ·磁珠辅助 TC-RCA 检测牡蛎基因组中细菌 DNA | 第135-143页 |
| ·方法与步骤 | 第135-138页 |
| ·细菌的活化与培养 | 第135页 |
| ·扩增细菌接头与引物的设计 | 第135-136页 |
| ·细菌基因组 DNA 与牡蛎基因组 DNA 的提取 | 第136页 |
| ·细菌 DNA 混合牡蛎基因组 DNA TspR I 酶切 | 第136页 |
| ·连接反应 | 第136-137页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第137页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第137-138页 |
| ·SYBR Green I 染色 | 第138页 |
| ·结果与讨论 | 第138-142页 |
| ·小结 | 第142-143页 |
| ·磁珠辅助 TC-RCA 检测牡蛎中有害细菌的侵染 | 第143-150页 |
| ·方法与步骤 | 第143-147页 |
| ·细菌的活化与培养 | 第143页 |
| ·扩增细菌接头与引物的设计 | 第143页 |
| ·副溶血弧菌人工污染牡蛎样品的构建 | 第143-144页 |
| ·人工污染样品基因组 DNA 的提取 | 第144-145页 |
| ·细菌 DNA 混合牡蛎基因组 DNA TspR I 酶切 | 第145页 |
| ·连接反应 | 第145-146页 |
| ·RCA 扩增反应 | 第146页 |
| ·RCA 产物 TspR I 酶切 | 第146页 |
| ·SYBR Green I 染色 | 第146-147页 |
| ·结果与讨论 | 第147-149页 |
| ·副溶血弧菌菌落计数结果 | 第147页 |
| ·细菌基因组 DNA 提取试剂盒提取样品的检测 | 第147-148页 |
| ·海洋生物基因组 DNA 提取试剂盒提取样品的检测 | 第148页 |
| ·联合 DNA 提取法提取样品的检测 | 第148-149页 |
| ·小结 | 第149-150页 |
| ·本章小结 | 第150页 |
| 参考文献 | 第150-152页 |
| 论文结论 | 第152-153页 |
| 已发表学术论文 | 第153-154页 |
| 参加的项目课题 | 第154-155页 |
| 个人简历 | 第155-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
