| 中文摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-34页 |
| 1.1 2,3-丁二醇的概述 | 第11-21页 |
| 1.1.1 2,3-丁二醇的理化性质、用途和生产工艺 | 第11-13页 |
| 1.1.2 2,3-丁二醇的生产菌株及其改造 | 第13-15页 |
| 1.1.3 以糖类为底物的 2,3-丁二醇的发酵生产策略 | 第15-20页 |
| 1.1.4 下游分离纯化工艺 | 第20-21页 |
| 1.2 乙偶姻的概述 | 第21-29页 |
| 1.2.1 乙偶姻的理化性质、用途和生产工艺 | 第21-22页 |
| 1.2.2 乙偶姻的生产菌株及其改造 | 第22-23页 |
| 1.2.3 以糖类为底物生产乙偶姻的发酵生产策略 | 第23-27页 |
| 1.2.4 以 2,3-丁二醇或双乙酰为底物的发酵生产策略 | 第27-28页 |
| 1.2.5 下游分离纯化工艺 | 第28-29页 |
| 1.3 使用枯草芽孢杆菌和谷氨酸棒杆菌作为工程菌株的优势 | 第29-30页 |
| 1.3.1 使用枯草芽孢杆菌的优势 | 第29页 |
| 1.3.2 使用谷氨酸棒杆菌的优势 | 第29-30页 |
| 1.4 使用可再生碳源和廉价氮源生产 2,3-丁二醇和乙偶姻发酵的优势 | 第30-32页 |
| 1.4.1 使用戊糖和己糖的一种或多种的混合物作为底物碳源 | 第30-31页 |
| 1.4.2 使用甘油作为底物碳源 | 第31-32页 |
| 1.4.3 使用廉价氮源提高生产强度 | 第32页 |
| 1.5 本文的选题背景和主要研究内容 | 第32-34页 |
| 1.5.1 选题背景 | 第32-33页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第33-34页 |
| 第二章 改造枯草芽孢杆菌高产手性D-(-)-2,3-丁二醇 | 第34-88页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-43页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第34-36页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第37-39页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第39-41页 |
| 2.1.5 培养基 | 第41-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-54页 |
| 2.2.1 引物的设计合成和基因测序 | 第43页 |
| 2.2.2 CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第43-44页 |
| 2.2.3 Tss法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第44-45页 |
| 2.2.4 质粒DNA的提取 | 第45页 |
| 2.2.5 DNA片段的纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.6 酶切与去磷酸化体系 | 第46页 |
| 2.2.7 连接体系 | 第46-47页 |
| 2.2.8 PCR | 第47-49页 |
| 2.2.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第49页 |
| 2.2.10 枯草芽孢杆菌的Spizizen转化 | 第49-50页 |
| 2.2.11 改良型枯草芽孢杆菌转化方法 | 第50页 |
| 2.2.12 基于两次单交换的无抗性标记基因敲除或过表达 | 第50-51页 |
| 2.2.13 枯草芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第51页 |
| 2.2.14 菌体生长特性的考察和摇瓶发酵条件 | 第51页 |
| 2.2.15 发酵液残糖的测定 | 第51-52页 |
| 2.2.16 蛋白质含量的测定 | 第52页 |
| 2.2.17 生物量的测定 | 第52页 |
| 2.2.18 乙偶姻还原酶/2,3-丁二醇脱氢酶酶活的测定 | 第52-53页 |
| 2.2.19 微生物胞内还原力的测定 | 第53-54页 |
| 2.2.20 微生物代谢产物和底物的测定 | 第54页 |
| 2.3 结果与分析 | 第54-86页 |
| 2.3.1 野生型枯草芽孢杆菌168生产 2,3-丁二醇的构型分析及证据 | 第54-56页 |
| 2.3.2 利用葡萄糖为底物产D-(-)-2,3-丁二醇的工程菌株构建 | 第56-64页 |
| 2.3.3 利用葡萄糖为底物工程菌株胞内还原力水平 | 第64-67页 |
| 2.3.4 利用葡萄糖为底物工程菌株胞内 2,3-丁二醇脱氢酶酶活测定 | 第67-69页 |
| 2.3.5 利用葡萄糖为底物摇瓶发酵实验 | 第69-74页 |
| 2.3.6 利用葡萄糖为底物的分批补料发酵实验 | 第74-75页 |
| 2.3.7 利用葡萄糖、木糖和阿拉伯糖的混合碳源生产D-(-)-2,3-丁二醇 | 第75-85页 |
| 2.3.8 利用基因简化菌发酵生产D-(-)-2,3-丁二醇 | 第85-86页 |
| 2.4 小结 | 第86-88页 |
| 第三章 改造枯草芽孢杆菌高产手性meso-丁二醇 | 第88-107页 |
| 3.1 实验材料 | 第88-90页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第88-90页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第90页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第90页 |
| 3.1.4 实验溶液 | 第90页 |
| 3.1.5 培养基 | 第90页 |
| 3.2 实验方法 | 第90页 |
| 3.3 结果与分析 | 第90-105页 |
| 3.3.1 meso-2,3-丁二醇工程菌株的构建 | 第90-94页 |
| 3.3.2 利用葡萄糖为底物生产meso-2,3-丁二醇的摇瓶发酵结果 | 第94-98页 |
| 3.3.3 利用葡萄糖为底物工程菌株发酵罐发酵表征 | 第98-102页 |
| 3.3.4 利用葡萄糖、木糖和阿拉伯糖的混合碳源生产meso-2,3-丁二醇 | 第102-104页 |
| 3.3.5 不同物种乙偶姻还原酶/2,3-丁二醇脱氢酶的进化关系 | 第104-105页 |
| 3.4 小结 | 第105-107页 |
| 第四章 改造枯草芽孢杆菌高产乙偶姻 | 第107-117页 |
| 4.1 实验材料 | 第107-109页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第107-108页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第108页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第108页 |
| 4.1.4 实验溶液 | 第108页 |
| 4.1.5 培养基 | 第108-109页 |
| 4.2 实验方法 | 第109页 |
| 4.3 结果与分析 | 第109-116页 |
| 4.3.1 发酵策略的选择 | 第109页 |
| 4.3.2 工程菌株的构建 | 第109-111页 |
| 4.3.3 发酵条件优化 | 第111-114页 |
| 4.3.4 高浓度糖批式发酵结果 | 第114-116页 |
| 4.4 小结 | 第116-117页 |
| 第五章 改造谷氨酸棒杆菌生产D-(-)-2,3-丁二醇 | 第117-128页 |
| 5.1 实验材料 | 第117-119页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第117-118页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第118页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第118-119页 |
| 5.1.4 培养基 | 第119页 |
| 5.2 实验方法 | 第119-121页 |
| 5.2.1 谷氨酸棒杆菌电转感受态细胞的制备 | 第120页 |
| 5.2.2 谷氨酸棒杆菌电转感受态细胞的转化 | 第120-121页 |
| 5.3 结果与分析 | 第121-127页 |
| 5.3.1 高产D-(-)-2,3-丁二醇的谷氨酸棒杆菌的优化策略 | 第121-122页 |
| 5.3.2 甘油等副产物生成途径的阻断 | 第122-124页 |
| 5.3.3 D-(-)-2,3-丁二醇生产菌株的构建 | 第124页 |
| 5.3.4 利用葡萄糖高产D-(-)-2,3-丁二醇的发酵实验 | 第124-126页 |
| 5.3.5 共利用葡萄糖和木糖生产D-(-)-2,3-丁二醇的发酵实验 | 第126-127页 |
| 5.4 本章小结 | 第127-128页 |
| 第六章 结论与展望 | 第128-132页 |
| 6.1 主要结论 | 第128-129页 |
| 6.2 创新点 | 第129-130页 |
| 6.3 展望 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-142页 |
| 发表论文和科研情况 | 第142-145页 |
| 附录 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
