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柿子单宁的性质、结构及其与几种蛇毒蛋白的相互作用研究

摘要第1-14页
ABSTRACT第14-18页
缩略语表第18-19页
第一章 前言第19-27页
 1 柿子资源综合利用现状第20-22页
   ·柿子果肉的综合利用第20-21页
   ·柿叶的综合利用第21页
   ·柿皮和柿蒂的综合利用第21-22页
 2 柿子果肉单宁的国内外研究进展第22-25页
   ·柿子单宁结构分析的研究进展第22-23页
   ·柿子单宁生理活性的研究进展第23-25页
     ·柿子单宁抗氧化活性的研究进展第24-25页
     ·柿子单宁解蛇毒能力的研究进展第25页
 3 研究目的、意义及内容第25-27页
第二章 柿子单宁提取工艺的优化第27-41页
 1 材料与方法第27-32页
   ·试验材料和仪器设备第27-29页
     ·试验原料第27-28页
     ·试剂第28-29页
     ·仪器及设备第29页
   ·试验方法第29-32页
     ·柿子果肉的基本组成分析第29页
       ·水分含量测定第29页
       ·还原糖含量测定第29页
       ·总糖含量测定第29页
       ·粗脂肪含量测定第29页
       ·总蛋白含量测定第29页
       ·维生素C含量测定第29页
     ·柿子单宁的提取工艺第29-32页
       ·提取方法第29-30页
       ·总酚(TP)含量的测定第30页
       ·缩合单宁(CT)含量的测定第30-31页
       ·提取溶剂的选择第31页
       ·提取次数的选择第31页
       ·果实前处理对提取的影响第31页
       ·提取条件的单因素试验第31页
       ·正交试验的设计方案第31-32页
     ·不同品种、不同组织中柿子单宁含量分析第32页
 2 结果与分析第32-40页
   ·柿子果肉的基本成分分析第32-33页
   ·柿子单宁的提取工艺及含量测定第33-39页
     ·提取溶剂的选择第33-35页
     ·提取次数的选择第35页
     ·果实前处理的选择第35-36页
     ·提取条件的单因素试验第36-38页
       ·提取温度的影响第36页
       ·提取时间的影响第36-37页
       ·酸浓度对提取率的影响第37页
       ·不同料液比对提取率的影响第37-38页
     ·正交试验结果分析第38-39页
   ·不同品种、柿子不同组织单宁含量的比较分析第39-40页
 3 讨论第40-41页
第三章 柿子单宁的分离纯化及结构分析第41-71页
 1 材料与方法第42-47页
   ·试验材料和仪器设备第42-43页
     ·试验材料第42页
     ·试剂第42页
     ·仪器及设备第42-43页
   ·试验方法第43-47页
     ·柿子单宁的大孔树脂纯化工艺第43-44页
       ·大孔树脂静态吸附量的测定第43页
       ·大孔吸附树脂静态解吸率的测定第43页
       ·大孔树脂的静态吸附动力学特征第43页
       ·上样速率对柿子单宁吸附效果的影响第43-44页
       ·流出液重复过柱对吸附率的影响第44页
       ·不同溶剂对洗脱效果的影响第44页
       ·洗脱曲线的考察第44页
       ·树脂重复使用次数考察第44页
       ·柿子单宁粗品的制备第44页
     ·柿子单宁的超滤分级工艺第44-45页
       ·超滤膜组件的选择第44-45页
       ·超滤透过速率的选择第45页
       ·超滤循环次数的选择第45页
       ·超滤膜重复使用次数考察第45页
       ·超滤膜的清洗第45页
       ·SMWT及HMWT的制备及其基本性质第45页
     ·柿子单宁各级分的HPLC分析及SMWT的HPLC-ESI-MS鉴定第45-46页
     ·凝胶渗透色谱法(GPC)测定HMWT相对分子量分布第46页
     ·傅立叶红外光谱(FT-IR)分析第46页
     ·HMWT硫解、酸水解产物的HPLC及HPLC-ESI-MS分析第46-47页
       ·HMWT的硫解及产物的HPLC-MS分析第46页
       ·HMWT的酸水解反应第46-47页
 2 结果与分析第47-68页
   ·柿子单宁的大孔吸附树脂纯化工艺第47-50页
     ·大孔吸附树脂对柿子单宁的静态吸附试验第47-48页
     ·101大孔吸附树脂对柿子单宁的动态吸附试验第48-50页
       ·上样流速对柿子单宁吸附率的影响第48页
       ·流出液重复过柱对树脂吸附率的影响第48页
       ·不同溶剂对柿子单宁洗脱效果的影响第48-49页
       ·洗脱曲线的考察第49页
       ·101大孔树脂重复使用次数第49页
       ·柿子单宁的制备第49-50页
   ·柿子单宁的超滤分级工艺第50-53页
     ·超滤膜组件的选择第50-51页
     ·超滤膜透过速率的选择第51-52页
     ·超滤循环次数的选择第52页
     ·超滤重复使用次数考察第52-53页
     ·超滤膜的清洗第53页
   ·SMWT及HMWT的基本特性第53-54页
     ·外观特性与感官评定第53页
     ·紫外吸收与显色反应第53页
     ·溶解性第53-54页
   ·柿子单宁不同级分的HPLC及HPLC-ESI-MS分析第54-57页
   ·HMWT的GPC分析第57-58页
   ·傅立叶红外光谱(FT-IR)分析第58-59页
   ·HMWT硫解、酸水解产物的HPLC及HPLC-ESI-MS分析第59-67页
     ·HMWT硫解产物的分析第59-62页
     ·HMWT酸水解产物的分析第62-67页
       ·水解产物在540nm处的HPLC-ESI-MS的分析第62-64页
       ·水解产物在280nm处的HPLC-ESI-MS的分析第64-67页
   ·HMWT的单体的结构鉴定第67-68页
 3 讨论第68-71页
   ·柿子单宁的分离纯化工艺第68-69页
   ·柿子单宁各级分的结构鉴定第69-71页
第四章 柿子单宁抗氧化活性、蛋白质结合能力及稳定性研究第71-96页
 1 材料与方法第72-78页
   ·试验材料和仪器设备第72-73页
     ·试验原料第72页
     ·试剂第72-73页
     ·仪器及设备第73页
   ·试验方法第73-78页
     ·柿子单宁在不同体系中的抗氧化能力测定第73-75页
       ·柿子单宁在2-脱氧-D-核糖体系中清除羟基自由基的能力第73-74页
       ·柿子单宁在甲基紫体系中清除羟基自由基的能力第74页
       ·柿子单宁在水杨酸体系中清除羟基自由基的能力第74-75页
       ·柿子单宁清除超氧阴离子自由基的能力第75页
       ·柿子单宁抑制亚油酸脂质过氧化的能力第75页
     ·HMWT与蛋白质的相互作用第75-77页
       ·考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度第75-76页
       ·HMWT与明胶、BSA结合能力的测定第76页
       ·温度对HMWT与BSA结合反应的影响第76页
       ·时间对HMWT与BSA结合反应的影响第76页
       ·pH值对HMWT与BSA结合反应的影响第76-77页
       ·无机盐对HMWT与BSA结合反应的影响第77页
       ·HMWT对BSA的荧光猝灭作用第77页
     ·HMWT溶液的稳定性第77-78页
       ·光照对HMWT溶液稳定性的影响第77页
       ·温度对HMWT溶液稳定性的影响第77页
       ·pH对HMWT溶液稳定性的影响第77-78页
       ·氧化剂对HMWT溶液稳定性的影响第78页
       ·还原剂对HMWT溶液稳定性的影响第78页
       ·β-环状糊精对HMWT溶液稳定性的影响第78页
       ·常见食品添加剂对HMWT溶液稳定性的影响第78页
       ·金属离子对HMWT溶液稳定性的影响第78页
 2 结果与分析第78-94页
   ·柿子单宁的抗氧化能力第78-81页
     ·柿子单宁对羟基自由基的清除能力第78-80页
     ·柿子单宁对邻苯三酚自氧化的抑制作用第80-81页
     ·柿子单宁抑制亚油酸脂质过氧化能力第81页
   ·HMWT与蛋白质的相互作用第81-90页
     ·HMWT和明胶、BSA的结合反应第81-83页
     ·影响HMWT和BSA结合反应的动力学因素第83-85页
       ·温度对HMWT和BSA结合反应的影响第83页
       ·时间对HMWT和BSA结合反应的影响第83-84页
       ·pH值对HMWT和BSA结合反应的影响第84-85页
       ·无机盐对HMWT和BSA结合反应的影响第85页
     ·HMWT对BSA的荧光猝灭作用第85-90页
       ·HMWT对BSA荧光光谱的影响第85-86页
       ·HMWT对BSA荧光猝灭的类型第86-88页
       ·HMWT与BSA结合的热力学性质第88-89页
       ·HMWT与BSA结合位点数第89页
       ·HMWT与BSA作用距离的计算第89-90页
   ·HMWT溶液的稳定性第90-94页
     ·光照对HMWT溶液稳定性的影响第90-91页
     ·温度对HMWT溶液稳定性的影响第91页
     ·pH对HMWT溶液稳定性的影响第91页
     ·氧化剂对HMWT溶液稳定性的影响第91-92页
     ·还原剂对HMWT溶液稳定性的影响第92页
     ·β-环状糊精对HMWT溶液稳定性的影响第92-93页
     ·常见添加剂对HMWT溶液稳定性的影响第93页
     ·金属离子对HMWT溶液稳定性的影响第93-94页
 3 讨论第94-96页
第五章 HMWT与蛇毒蛋白的相互作用及解毒研究第96-132页
 1 材料与方法第96-108页
   ·实验材料和仪器设备第96-99页
     ·实验原料第96-97页
     ·试剂第97-99页
     ·仪器及设备第99页
   ·实验方法第99-108页
     ·酶活测定及SDS-PAGE电泳样品的前处理第99页
     ·HMWT对蛇毒蛋白中酶活力的影响第99-102页
       ·HMWT对蛋白水解酶活力的影响第99-100页
       ·HMWT对磷脂酶A_2酶活力的影响第100页
       ·HMWT对L-氨基酸氧化酶活力的影响第100-101页
       ·HMWT对精氨酸脂酶活力的影响第101-102页
       ·HMWT对乙酰胆碱酯酶活力的影响第102页
       ·HMWT对类凝血酶活力的影响第102页
     ·HMWT的急性毒性试验第102-103页
       ·急性毒性预试验第102页
       ·小鼠腹腔注射(i.P)给药的急性毒性试验第102-103页
       ·小鼠ip.给药的LD_(50)值测定第103页
     ·HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP所致的小鼠肌肉毒性的影响第103-104页
       ·小鼠血清中肌酸激酶(CK)的测定第103页
       ·小鼠趾长伸肌(EDL肌)组织切片制作第103-104页
     ·HMWT对AhPVP、AaVP所致的小鼠皮下出血的影响第104-105页
     ·HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第105-106页
       ·AhPVP、AaVP、NnaVP对小鼠的致死作用第105页
       ·不同给药方式中HMWT的剂量设置第105页
       ·口服灌胃HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第105-106页
       ·腹腔注射HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第106页
       ·静脉注射HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第106页
       ·预防给药HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第106页
     ·AhPVP中PLA_2的分离纯化第106-107页
       ·粗蛇毒分离前处理第106页
       ·分离过程中PLA_2活性的检测第106-107页
       ·AhPVP中PLA_2的Sephadex G-75层析分离第107页
       ·AhPVP中PLA_2的Sephadex DEAE A-50纯化第107页
       ·用SDS-PAGE检测所得组分的纯度第107页
     ·AhPVP、AaVP、NnaVP及PLA_2与HMWT的相互作用第107-108页
       ·HMWT与AhPVP、AaVP、NnaVP相互作用的SDS-PAGE分析第107页
       ·HMWT与PLA_2相互作用的红外光谱分析第107-108页
       ·HMWT与PLA_2相互作用的圆二色谱分析第108页
 2 结果与分析第108-130页
   ·HMWT对蛇毒中主要酶活力的影响第108-112页
     ·对蛋白水解酶活力的影响第108-109页
     ·对磷脂酶A_2活力的影响第109-110页
     ·对L-氨基酸氧化酶活力的影响第110页
     ·对精氨酸酯酶活力的抑制第110-111页
     ·对乙酰胆碱酯酶活力的抑制第111-112页
     ·对类凝血酶活力的抑制第112页
   ·HMWT急性毒性试验第112-113页
   ·HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP所致的小鼠肌肉毒性的影响第113-117页
     ·小鼠血清中肌酸激酶(CK)的测定第113-114页
     ·组织切片观察第114-117页
   ·HMWT对AhPVP、AaVP所致的小鼠皮下出血的影响第117-119页
   ·HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第119-122页
     ·口服灌胃HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第119-120页
     ·腹腔注射HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第120-121页
     ·静脉注射HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第121-122页
   ·预防给药HMWT对AhPVP、AaVP、NnaVP染毒小鼠的体内解毒作用第122-123页
   ·AhPVP中PLA_2的纯化第123-125页
     ·AhPVP中PLA_2的Sephadex G-75柱层析分离第123-124页
     ·AhPVP中PLA_2的Sephadex DEAE A-50纯化第124页
     ·纯化所得组分的SDS-PAGE检测第124-125页
   ·AhPVP、AaVP、NnaVP及PLA_2与HMWT的相互作用第125-130页
     ·HMWT与AhPVP、AaVP、NnaVP相互作用的SDS-PAGE分析第125-127页
     ·PLA_2与HMWT的相互作用的红外光谱分析第127-129页
     ·PLA_2与HMWT的相互作用的圆二色谱分析第129-130页
 3 讨论第130-132页
第六章 结论第132-134页
参考文献第134-148页
致谢第148-149页
附录第149页

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