| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 人参皂苷的研究进展 | 第9-16页 |
| 1.1.1 人参皂苷的化学组分 | 第9页 |
| 1.1.2 人参皂苷的生产方式 | 第9-12页 |
| 1.1.3 人参皂苷的生物合成 | 第12-16页 |
| 1.1.4 人参皂苷的药用价值 | 第16页 |
| 1.2 大肠杆菌类异戊二烯途径及其改造的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 鲨烯和环氧化鲨烯 | 第16-18页 |
| 1.2.2 大肠杆菌类异戊二烯途径在萜类化合物合成中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 本课题的目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 药品与试剂 | 第23-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 大肠杆菌及酿酒酵母的培养和保藏 | 第26页 |
| 2.2.2 碱裂解法提取大肠杆菌基因组 | 第26页 |
| 2.2.3 碱裂解法抽提大肠杆菌质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.4 玻璃珠法提取酿酒酵母基因组 | 第27页 |
| 2.2.5 目的片段的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.6 凝胶电泳法检测DNA | 第28页 |
| 2.2.7 DNA片段的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.8 DNA的酶切与连接反应 | 第29页 |
| 2.2.9 化转法大肠杆菌感受态的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.10 电转法大肠杆菌感受态的制备 | 第30页 |
| 2.2.11 大肠杆菌感受态细胞的转化（热激法） | 第30-31页 |
| 2.2.12 大肠杆菌感受态细胞的转化（电转化法） | 第31页 |
| 2.2.13 甲基球菌SE异源基因的密码子优化及其合成 | 第31页 |
| 2.2.14 从大肠杆菌中提取鲨烯和 2,3-环氧化鲨烯 | 第31-32页 |
| 2.2.15 HPLC检测鲨烯和 2,3-环氧化鲨烯含量 | 第32页 |
| 2.2.16 LC-MS检测2,3-环氧化鲨烯 | 第32-33页 |
| 第三章 大肠杆菌中鲨烯合成模块的构建 | 第33-50页 |
| 3.1 构建合成鲨烯的大肠杆菌工程菌 | 第33-36页 |
| 3.1.1 构建表达载体pLU01 | 第33-35页 |
| 3.1.2 鲨烯合成检测 | 第35-36页 |
| 3.2 大肠杆菌合成鲨烯平台的优化 | 第36-43页 |
| 3.2.1 构建法尼基合酶基因（isp A）过表达载体 | 第37-38页 |
| 3.2.2 构建异戊烯焦磷酸异构酶基因（idi）过表达载体 | 第38-41页 |
| 3.2.3 电转法实现内源基因法尼基焦磷酸合酶（ispA）、异戊烯焦磷酸异构酶基因（idi）在大肠杆菌BL21(DE3)中的过表达 | 第41-43页 |
| 3.3 大肠杆菌工程菌合成鲨烯发酵条件的优化 | 第43-48页 |
| 3.3.1 大肠杆菌工程菌最适温度的确定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 大肠杆菌工程菌最适有机氮源的确定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 大肠杆菌工程菌最适IPTG诱导浓度的确定 | 第45-46页 |
| 3.3.4 大肠杆菌工程菌最适碳源的确定 | 第46-47页 |
| 3.3.5 大肠杆菌工程菌最适p H的确定 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-50页 |
| 第四章 大肠杆菌中 2,3-环氧化鲨烯合成模块的构建 | 第50-65页 |
| 4.1 构建酵母鲨烯环氧酶基因（erg1）载体 | 第50-53页 |
| 4.2 构建甲基球菌鲨烯环氧酶基因（mcse）载体 | 第53-55页 |
| 4.3 构建拟南芥NADPH-P450还原酶协同作用的 2,3-环氧化鲨烯合成模块 | 第55-59页 |
| 4.3.1 拟南芥NADPH-P450还原酶的扩增 | 第55-56页 |
| 4.3.2 构建甲基球菌鲨烯环氧酶与拟南芥NADPH-P450还原酶协同作用载体 | 第56-57页 |
| 4.3.3 构建酵母鲨烯环氧酶与拟南芥NADPH-P450还原酶协同作用载体 | 第57-59页 |
| 4.4 构建酵母NADPH-P450还原酶协同作用的 2,3-环氧化鲨烯合成模块 | 第59-62页 |
| 4.4.1 酵母NADPH-P450还原酶的扩增 | 第59-60页 |
| 4.4.2 构建甲基球菌鲨烯环氧酶与酵母NADPH-P450还原酶协同作用载体 | 第60-61页 |
| 4.4.3 构建酵母鲨烯环氧酶与酵母NADPH-P450还原酶协同作用载体 | 第61-62页 |
| 4.5 2,3-环氧化鲨烯的检测 | 第62-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65页 |
| 5.2 展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
