| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 代谢工程改造大肠杆菌生产琥珀酸 | 第11-20页 |
| 1.1.1 敲除竞争性副产物 | 第12-13页 |
| 1.1.2 失活磷酸烯醇式丙酮酸转运系统（PTS） | 第13页 |
| 1.1.3 过表达自身或外源的关键酶 | 第13-15页 |
| 1.1.4 提高NADH的供给 | 第15-17页 |
| 1.1.5 扰动磷酸戊糖途径(PP途径) | 第17-19页 |
| 1.1.6 强化琥珀酸的输出 | 第19-20页 |
| 1.1.7 代谢进化 | 第20页 |
| 1.2 本课题研究思路和研究内容 | 第20-23页 |
| 1.2.1 研究思路 | 第20-21页 |
| 1.2.2 研究内容和技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.4 溶剂和配制方法 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| 2.2.3 PCR片段或酶切片段的回收和纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.4 大肠杆菌质粒的提取 | 第31页 |
| 2.2.5 质粒的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.6 大肠杆菌化转感受态的制备（CaCl2法） | 第34页 |
| 2.2.7 大肠杆菌化学感受态细胞的转化 | 第34-35页 |
| 2.2.8 大肠杆菌电转感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌电转化感受态细胞的转化 | 第35页 |
| 2.2.10 大肠杆菌基因组的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.11 大肠杆菌基因组的操作 | 第36-37页 |
| 2.2.12 厌氧的摇瓶发酵 | 第37-38页 |
| 2.2.13 菌体浓度的测定 | 第38页 |
| 2.2.14 发酵产物的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.15 葡萄糖的测定 | 第39页 |
| 2.2.16 Real-Time荧光定量PCR | 第39-41页 |
| 2.2.17 细胞内NADH/NAD+的测定 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第42-78页 |
| 3.1 利用PP途径合成琥珀酸的优势 | 第42-44页 |
| 3.1.1 大肠杆菌厌氧条件下最大理论得率合成琥珀酸的途径分析 | 第42-43页 |
| 3.1.2 节约外源CO2的供应 | 第43-44页 |
| 3.2 产琥珀酸大肠杆菌的代谢工程改造 | 第44-64页 |
| 3.2.1 大肠杆菌自身zwf和gnd基因的诱导表达 | 第44-46页 |
| 3.2.2 过表达galp基因 | 第46-48页 |
| 3.2.3 过表达glk基因 | 第48-50页 |
| 3.2.4 过表达谷氨酸棒杆菌的pyc基因 | 第50-52页 |
| 3.2.5 过表达dcuB基因 | 第52-54页 |
| 3.2.6 过表达dcuC基因 | 第54-56页 |
| 3.2.7 敲除zwf243-gnd361前的阻遏蛋白结合位点 | 第56-58页 |
| 3.2.8 基因pgi的微调 | 第58-64页 |
| 3.3 菌株的发酵结果与分析 | 第64-78页 |
| 3.3.1 解调PP途径对琥珀酸合成的影响 | 第64-67页 |
| 3.3.2 引入产琥珀酸放线杆菌的pepck并进一步加强NADH的水平 | 第67-68页 |
| 3.3.3 敲除乙酸合成基因ackA-pta对琥珀酸得率的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.4 过表达galp和glk对菌株糖耗速率的影响 | 第69-70页 |
| 3.3.5 引入谷氨酸棒杆菌的pyc对琥珀酸合成的影响 | 第70-71页 |
| 3.3.6 过表达dcuB和dcuC对琥珀酸得率的影响 | 第71-73页 |
| 3.3.7 敲除zwf243-gnd361前的阻遏蛋白结合位点对琥珀酸得率的影响 | 第73-74页 |
| 3.3.8 微调pgi对琥珀酸得率的影响 | 第74-78页 |
| 第四章 结论与展望 | 第78-81页 |
| 4.1 实验结论 | 第78-80页 |
| 4.2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第87-88页 |
| 发表的论文 | 第87页 |
| 参加科研情况 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
