| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第18-34页 |
| 1.1 海藻糖的发现 | 第18页 |
| 1.2 海藻糖理化性质 | 第18页 |
| 1.3 海藻糖的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 国内外研究现状 | 第19-20页 |
| 1.5 海藻糖生物合成途径 | 第20-24页 |
| 1.5.1 OtsBA途径 | 第20-22页 |
| 1.5.2 磷酸化系统 | 第22页 |
| 1.5.3 两步法转化生成海藻糖 | 第22-24页 |
| 1.5.4 分子内的转糖苷作用来生产海藻糖 | 第24页 |
| 1.6 海藻糖生产的生物过程 | 第24-25页 |
| 1.6.1 酶溶液批次反应过程 | 第24-25页 |
| 1.6.2 固定化细胞生产工艺 | 第25页 |
| 1.7 高密度发酵工艺 | 第25-30页 |
| 1.7.1 渗透发酵 | 第25-26页 |
| 1.7.2 诱导策略 | 第26-27页 |
| 1.7.3 IPTG诱导 | 第27-28页 |
| 1.7.4 诱导细胞浓度 | 第28页 |
| 1.7.5 诱导温度 | 第28页 |
| 1.7.6 自动诱导(Auto-induction) | 第28-29页 |
| 1.7.7 直接补料 | 第29-30页 |
| 1.7.8 反馈补料控制 | 第30页 |
| 1.8 固定化酶生产工艺 | 第30-32页 |
| 1.9 结论 | 第32-34页 |
| 第二章 摇瓶中发酵培养基的选择和优化 | 第34-54页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 菌株 | 第34-35页 |
| 2.2.2 试剂 | 第35页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-37页 |
| 2.3.1 发酵方法 | 第36页 |
| 2.3.2 粗酶液制备 | 第36页 |
| 2.3.3 麦芽糖催化反应 | 第36页 |
| 2.3.4 酶活测定 | 第36-37页 |
| 2.4 分析检测方法 | 第37-38页 |
| 2.4.1 菌体密度的检测 | 第37页 |
| 2.4.2 Bradford法测蛋白浓度 | 第37页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE | 第37页 |
| 2.4.4 糖的检测 | 第37页 |
| 2.4.5 海藻糖产率计算公式 | 第37-38页 |
| 2.5 培养基选择 | 第38-39页 |
| 2.6 IPTG浓度优化 | 第39-41页 |
| 2.7 乳糖诱导浓度优化 | 第41-44页 |
| 2.8 TB培养基成分优化 | 第44-48页 |
| 2.8.1 酵母粉浓度 | 第44-45页 |
| 2.8.2 硫酸镁浓度 | 第45-47页 |
| 2.8.3 甘油浓度 | 第47-48页 |
| 2.9 合成培养基的优化 | 第48-51页 |
| 2.9.1 磷酸盐的优化 | 第48-49页 |
| 2.9.2 硫酸铵浓度优化 | 第49-50页 |
| 2.9.3 甘油浓度优化 | 第50-51页 |
| 2.10 本章小结 | 第51-54页 |
| 第三章 发酵工艺优化及放大 | 第54-76页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第54页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第54-55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55页 |
| 3.3.1 合成培养基乙酸滴定 | 第55页 |
| 3.3.2 HPLC法测定乙酸和甘油 | 第55页 |
| 3.4 16℃发酵 | 第55-58页 |
| 3.4.1 溶氧限制批次发酵 | 第55-58页 |
| 3.4.2 16℃溶氧限制下的补料发酵及诱导生物量 | 第58页 |
| 3.5 21℃发酵 | 第58-67页 |
| 3.5.1 21℃DO-stat IPTG诱导的补料发酵 | 第58-60页 |
| 3.5.2 低流速甘油补料发酵 | 第60-62页 |
| 3.5.3 高流速甘油流加发酵 | 第62-63页 |
| 3.5.4 混合补料发酵 | 第63-66页 |
| 3.5.5 乳糖补加策略 | 第66-67页 |
| 3.6 28℃补料发酵 | 第67-74页 |
| 3.6.1 28℃乳糖诱导 | 第67-68页 |
| 3.6.2 28℃延后诱导 | 第68-70页 |
| 3.6.3 28℃合成培养基发酵 | 第70-71页 |
| 3.6.4 玉米浆(CSL)替代发酵 | 第71-74页 |
| 3.7 发酵工艺放大(3M~3) | 第74页 |
| 3.8 本章小结 | 第74-76页 |
| 第四章 海藻糖合成酶反应体系优化 | 第76-83页 |
| 4.1 引言 | 第76页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第76页 |
| 4.3 实验方法 | 第76页 |
| 4.4 分析方法 | 第76页 |
| 4.5 葡萄糖生成量随时间变化关系 | 第76-77页 |
| 4.6 反应酶量优化 | 第77-78页 |
| 4.7 葡萄糖对海藻糖转化率影响 | 第78-80页 |
| 4.8 催化体系优化 | 第80-81页 |
| 4.9 中试放大反应(8M~3) | 第81-82页 |
| 4.10 本章小结 | 第82-83页 |
| 第五章 海藻糖合成酶TreS的固定化利用 | 第83-98页 |
| 5.1 引言 | 第83页 |
| 5.2 实验试剂及仪器 | 第83页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第83页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第83页 |
| 5.3 实验方法 | 第83-85页 |
| 5.3.1 TreS的固定化 | 第83-84页 |
| 5.3.2 Km测定 | 第84页 |
| 5.3.3 固定化酶反应 | 第84页 |
| 5.3.4 固定化TreS和游离TreS对比反应 | 第84-85页 |
| 5.4 TreS吸附固定化 | 第85-86页 |
| 5.5 Silicalite-1固定化的优化 | 第86-90页 |
| 5.5.1 3-氨丙基三甲氧基硅烷(APS)优化 | 第86-87页 |
| 5.5.2 戊二醛(GA)共价桥连TreS | 第87-88页 |
| 5.5.3 TreS粗酶用量的优化 | 第88-90页 |
| 5.6 固定化酶重复性测试 | 第90-91页 |
| 5.7 固定化TreS与游离TreS对比 | 第91-95页 |
| 5.7.1 Km值对比 | 第91-92页 |
| 5.7.2 最适反应pH | 第92页 |
| 5.7.3 最适反应温度 | 第92-93页 |
| 5.7.4 葡萄糖产率(R_(g/m))对比 | 第93-95页 |
| 5.8 酶反应的可能机制 | 第95-96页 |
| 5.9 本章小结 | 第96-98页 |
| 第六章 结论与展望 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 附录 | 第108-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第112-114页 |
| 作者及导师简介 | 第114-115页 |
| 专业学位硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第115-116页 |
