LAMP和PCR检测单核细胞增生性李斯特氏菌的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-26页 |
| ·立题背景及意义 | 第10-11页 |
| ·单增李斯特的简介 | 第11-14页 |
| ·单增李斯特的分类 | 第11页 |
| ·单增李斯特的生物学特征 | 第11-12页 |
| ·单增李斯特的血清型 | 第12页 |
| ·单增李斯特的致病因子 | 第12-13页 |
| ·单增李斯特的流行病学 | 第13-14页 |
| ·单增李斯特检测方法研究现状 | 第14-15页 |
| ·传统分离鉴定方法 | 第14页 |
| ·免疫学检测方法 | 第14-15页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第15页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)技术 | 第15-23页 |
| ·LAMP法的概述 | 第15-16页 |
| ·LAMP法的特点 | 第16页 |
| ·LAMP法的引物设计 | 第16-18页 |
| ·LAMP法的基本原理 | 第18-21页 |
| ·LAMP法产物的检测方法 | 第21-22页 |
| ·LAMP法的应用 | 第22-23页 |
| ·FTA滤膜的介绍 | 第23-25页 |
| ·基因的储藏 | 第24页 |
| ·用于医学检测 | 第24页 |
| ·用于植物基因组的提取 | 第24页 |
| ·用于食源性致病菌的检测 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-35页 |
| ·试验材料 | 第26-28页 |
| ·试验菌株 | 第26页 |
| ·主要培养基 | 第26-27页 |
| ·仪器与设备 | 第27页 |
| ·生化试剂与样品 | 第27-28页 |
| ·试验方法 | 第28-35页 |
| ·菌种的培养 | 第28页 |
| ·细菌DNA模板的提取 | 第28-29页 |
| ·PCR引物的确定 | 第29页 |
| ·PCR反应条件优化 | 第29页 |
| ·PCR反应产物的鉴定 | 第29页 |
| ·PCR引物特异性试验 | 第29-30页 |
| ·PCR灵敏度试验 | 第30页 |
| ·人工污染鸡肉样品，确定PCR检出限 | 第30页 |
| ·LAMP反应引物设计 | 第30-33页 |
| ·LAMP反应条件的优化 | 第33页 |
| ·LAMP引物特异性试验 | 第33-34页 |
| ·LAMP灵敏度试验 | 第34页 |
| ·LAMP产物的酶切分析 | 第34页 |
| ·人工污染鸡肉样品，确定LAMP检出限 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-50页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第35-37页 |
| ·Mg~(2+)浓度的优化 | 第35页 |
| ·退火温度的优化 | 第35-36页 |
| ·反应循环数的优化 | 第36-37页 |
| ·PCR反应的热启动与冷启动的比较 | 第37页 |
| ·PCR引物特异性试验 | 第37-38页 |
| ·PCR灵敏度试验 | 第38-39页 |
| ·人工污染鸡肉样品，确定PCR检出限 | 第39页 |
| ·LAMP的建立 | 第39-42页 |
| ·第一套引物的反应结果 | 第39-41页 |
| ·第二套引物的反应结果 | 第41-42页 |
| ·LAMP反应条件的优化 | 第42-46页 |
| ·Mg~(2+)浓度的优化 | 第42页 |
| ·反应温度的优化 | 第42-43页 |
| ·反应时间的优化 | 第43-44页 |
| ·外引物和内引物浓度比的优化 | 第44页 |
| ·甜菜碱对LAMP反应的影响 | 第44-45页 |
| ·外引物对LAMP反应的影响 | 第45-46页 |
| ·LAMP引物特异性试验 | 第46-47页 |
| ·LAMP灵敏度试验 | 第47页 |
| ·LAMP产物的酶切分析 | 第47-49页 |
| ·人工污染鸡肉样品，确定LAMP检出限 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| ·模板DNA的提取 | 第50页 |
| ·靶基因的选择 | 第50页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第50-51页 |
| ·镁离子(Mg~(2+))浓度的确定 | 第51页 |
| ·退火温度的确定 | 第51页 |
| ·LAMP反应中的影响因素 | 第51-53页 |
| ·LAMP引物 | 第51-52页 |
| ·DNA聚合酶 | 第52页 |
| ·模板DNA | 第52页 |
| ·甜菜碱 | 第52-53页 |
| ·PCR和LAMP的污染防控 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录A | 第61-64页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
