| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-23页 |
| 1.1 课题来源 | 第9页 |
| 1.2 研究背景及目的意义 | 第9-10页 |
| 1.3 轮状病毒的研究现状 | 第10-16页 |
| 1.3.1 轮状病毒简介 | 第10-12页 |
| 1.3.2 轮状病毒生物学特性 | 第12-14页 |
| 1.3.3 轮状病毒的分类 | 第14-15页 |
| 1.3.4 轮状病毒VP7蛋白的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统 | 第16-20页 |
| 1.4.1 毕赤酵母表达系统的简介 | 第16-17页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统的转化机制 | 第17-20页 |
| 1.5 课题技术路线及主要研究内容 | 第20-23页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 实验所用的菌株与质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验所用的培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验所用酶和试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 实验试剂配置 | 第25-26页 |
| 2.1.5 引物 | 第26页 |
| 2.1.6 实验中所用的仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-41页 |
| 2.2.1 轮状病毒中vp7基因的克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.2 重组载体的构建及验证 | 第30-32页 |
| 2.2.3重组载体电转化毕赤酵母GS115 | 第32-34页 |
| 2.2.4 转化子的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.5 诱导目的蛋白表达 | 第35页 |
| 2.2.6 毕赤酵母RNA的提取及RT-PCR | 第35-37页 |
| 2.2.7 WesternBlotting | 第37-38页 |
| 2.2.8 用BCA法测定VP7蛋白质浓度 | 第38-39页 |
| 2.2.9 发酵条件优化 | 第39-41页 |
| 第3章 轮状病毒vp7基因重组载体的构建 | 第41-45页 |
| 3.1 轮状病毒vp7基因的获得 | 第41-42页 |
| 3.2 重组载体的构建及验证 | 第42-44页 |
| 3.3 本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 毕赤酵母电转化及转化子筛选鉴定 | 第45-53页 |
| 4.1 重组载体线性化的制备 | 第45-46页 |
| 4.2 毕赤酵母GS115感受态的制备 | 第46页 |
| 4.3 毕赤酵母GS115电转化及转化子的筛选 | 第46-51页 |
| 4.3.1 在DNA水平筛选转化子 | 第46-48页 |
| 4.3.2 在RNA水平筛选转化子 | 第48-50页 |
| 4.3.3 在蛋白水平筛选转化子 | 第50-51页 |
| 4.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 第5章 VP7蛋白诱导发酵条件优化 | 第53-59页 |
| 5.1 利用BCA法测蛋白浓度的标准曲线的绘制 | 第53页 |
| 5.2 不同温度对诱导表达VP7蛋白含量的影响 | 第53-54页 |
| 5.3 不同初始pH对诱导表达VP7蛋白含量的影响 | 第54-55页 |
| 5.4 不同加入甲醇量对诱导表达VP7蛋白含量的影响 | 第55-56页 |
| 5.5 不同诱导时间对诱导表达VP7蛋白含量的影响 | 第56-57页 |
| 5.6 正交试验优化提取条件 | 第57-58页 |
| 5.7 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
