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小鼠蛋白磷酸酶PP2A-Aα基因启动子的克隆和功能分析

中文摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
第一章 前言第12-30页
   ·基因表达与蛋白可逆磷酸化第12-15页
   ·真核生物的蛋白激酶与蛋白磷酸酶第15-24页
     ·蛋白激酶的重要性及其分类第15-17页
     ·蛋白磷酸酶第17-24页
   ·真核生物基因表达调控及转录因子参与调控简介第24-30页
     ·真核生物基因表达调控第24-26页
     ·转录因子参与基因表达调控第26-30页
第二章 实验部分之材料与方法第30-60页
   ·材料与试剂第30-31页
     ·材料第30页
     ·试剂与仪器第30-31页
   ·方法第31-60页
     ·小鼠基因组DNA(genomic DNA)的提取第31-33页
     ·小鼠PP2A-Aα基因启动子的克隆第33页
     ·小鼠PP2A-Aα基因启动子删除突变质粒的构建第33-34页
     ·PCR产物的克隆及序列分析第34-35页
     ·小鼠PP2A-Aα基因启动子体外定点突变质粒的构建第35-38页
     ·转染用高纯质粒的提取及其浓度的测定第38-39页
     ·WESTERN BLOT技术检测ARPE-19和FHL124细胞系中ETS-1,CREB,AP-2α和SP1的表达水平第39-43页
     ·ARPE-19和FHL124细胞的培养及其共转染分析第43-44页
     ·小鼠PP2A-Aα基因核心启动子A5活性与转录因子ETS-1,CREB,AP-2A或SP1剂量的关系第44-46页
     ·用双荧光素酶试剂盒检测细胞转染后其荧光素酶的活性第46-47页
     ·ARPE和FHL124细胞核蛋白的提取第47-49页
     ·凝胶迁移滞后方法分析ARPE-19和FHL124核蛋白中各转录因子与PP2A-Aα基因启动子序列的体外相互作用第49-56页
     ·染色质免疫沉降法分析转录因子ETS-1,CREB与小鼠PP2A-AA基因启动子序列的体内结合情况第56-60页
第三章 实验结果第60-92页
   ·小鼠PP2A-Aα基因启动子的克隆第60-62页
   ·小鼠PP2A-Aα基因启动子序列的初步分析及从5′端删除部分序列质粒的构建第62-64页
   ·用高纯质粒A1,A2,A3,A4,A5和A6转染ARPE-19细胞及双荧光报告基因系统定义PP2A-Aα基础启动子与核心启动子区第64-66页
   ·PP2A-Aα核心启动子中多个顺式作用元件的软件预测结果第66-67页
   ·WESTERN BLOT结果证实多个转录因子在不同的视觉细胞ARPE-19和FHL124细胞系中都有表达第67-69页
   ·小鼠PP2A-Aα基因核心启动子A5与突变转录因子ETS-1,CREB,AP-2α或SP1结合序列后其相对荧光素酶活性第69-74页
   ·小鼠PP2A-Aα基因核心启动子A5活性与转录因子ETS-1,CREB,AP-2α或SP1不同剂量间的关系第74-79页
   ·凝胶迁移滞后实验检测转录因子ETS-1,CREB,AP-2A或SP1在体外与小鼠PP2A-Aα基因启动子序列的结合第79-89页
   ·染色质免疫沉降分析证实ETS-1和CREB在体内能结合到PP2A-A基因的启动子上第89-92页
第四章 讨论第92-115页
   ·蛋白磷酸酶2A(PP2A)是一个三聚体蛋白复合物第92-93页
   ·蛋白磷酸酶2A(PROTEIN PHOSPHATASE 2A,PP2A)的重要作用第93-101页
     ·PP2A参与Rb蛋白家族的活性调节第94-95页
     ·PP2A在Wnt信号通路中的作用第95-96页
     ·PP2A在MAP激酶通路中的作用第96-97页
     ·PP2A在肿瘤发生中的作用第97-99页
     ·PP2A在细胞凋亡中的作用第99-101页
   ·PP2AA(PR65/A)亚基突变导致人的多种肿瘤发生第101-105页
   ·转录因子ETS-1及其在调节小鼠PP2A-Aα基因表达中的作用第105-108页
   ·转录因子CREB在调节PP2A-Aα基因表达中亦起着非常重要的作用第108-111页
   ·转录因子AP-2α也参与PP2A-Aα基因表达的调控第111-114页
   ·转录因子SP1负向调节PP2A-Aα基因的表达第114-115页
第五章 研究总结与展望第115-118页
参考文献第118-129页
博士学习期间撰写、发表的主要论文第129-131页
致谢第131-133页

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