OsHsp82基因的克隆、分析及互作蛋白研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.热激蛋白研究进展 | 第10-15页 |
| ·热激生理 | 第10页 |
| ·热激蛋白的发现 | 第10-11页 |
| ·热激蛋白的分类 | 第11页 |
| ·热激蛋白的功能 | 第11-14页 |
| ·热激蛋白的保护作用 | 第11-12页 |
| ·热激蛋白在植物发育中的作用 | 第12-13页 |
| ·分子伴侣功能 | 第13-14页 |
| ·热激蛋白基因的表达调控 | 第14-15页 |
| 2.Hsp90家族及其结合蛋白研究进展 | 第15-19页 |
| ·Hsp90家族 | 第15-16页 |
| ·Hsp90家族功能域 | 第16-17页 |
| ·Hsp90家族结合蛋白 | 第17-19页 |
| 3.本实验的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章.OsHsp82的克隆及表达分析 | 第20-33页 |
| 1、材料与方法 | 第20-28页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-28页 |
| ·RNA提取 | 第20-21页 |
| ·RNA纯化 | 第21页 |
| ·mRNA差异显示及基因片段克隆 | 第21-22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·DNA片段的连接 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23-24页 |
| ·克隆的筛选以及阳性克隆的检测 | 第24页 |
| ·测序质粒DNA的制备、PCR反应及序列测定 | 第24-25页 |
| ·序列分析及cDNA克隆 | 第25页 |
| ·RT-PCR | 第25-28页 |
| 2.结果与分析 | 第28-32页 |
| ·cDNA克隆与序列分析 | 第28页 |
| ·OsHsp82氨基酸序列相似性分析 | 第28-30页 |
| ·OsHsp82在不同逆境处理下的表达分析 | 第30-32页 |
| 3.小结 | 第32-33页 |
| 第三章 水稻Hsp82结合蛋白研究 | 第33-47页 |
| 1 材料与方法 | 第33-42页 |
| ·实验材料、菌株和试剂 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-42页 |
| ·pGBKT7-OsHsp82载体构建 | 第34-35页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·转化到酵母菌株AH109或Y187 | 第36页 |
| ·检测DNA-BD融合基因的自身转录活性 | 第36页 |
| ·检测诱饵蛋白对酵母的毒性 | 第36-37页 |
| ·酵母共转化 | 第37页 |
| ·pGEX-OsHsp82载体的构建 | 第37-38页 |
| ·pET-RBBI3-3载体的构建 | 第38-40页 |
| ·蛋白质体外诱导表达及检测 | 第40页 |
| ·检测诱导蛋白可溶性 | 第40页 |
| ·GST标签蛋白纯化 | 第40-41页 |
| ·蛋白质体外结合 | 第41-42页 |
| 2.结果与分析 | 第42-46页 |
| ·酵母双杂交结果与分析 | 第42-45页 |
| ·体外结合实验结果 | 第45-46页 |
| 3.小结 | 第46-47页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第47-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
