| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-28页 |
| ·胰岛素样生长因子1的研究进展 | 第11-19页 |
| ·IGF-1的发现 | 第11-12页 |
| ·IGF-1的生化性质 | 第12页 |
| ·IGF-1的基因及成熟肽结构 | 第12-13页 |
| ·IGF-1合成分泌及活性的调节 | 第13-14页 |
| ·IGF-1的生理作用 | 第14-15页 |
| ·IGF-1的治疗应用 | 第15-18页 |
| ·IGF-1的副作用 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第19-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学特性 | 第20-21页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌株 | 第21-22页 |
| ·毕赤酵母表达载体的选择 | 第22-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的转化与基因整合 | 第24页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第24-25页 |
| ·密码子偏好与蛋白表达的关系 | 第25页 |
| ·胞内表达与胞外分泌表达的选择 | 第25-26页 |
| ·培养条件的优化 | 第26-27页 |
| ·研究目的及主要研究内容 | 第27-28页 |
| 2 实验部分 | 第28-43页 |
| ·实验材料 | 第28-31页 |
| ·质粒载体及菌种 | 第28页 |
| ·工具酶 | 第28页 |
| ·试剂(盒)及耗材 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·培养基和实验用液 | 第29-31页 |
| ·实验方法与步骤 | 第31-43页 |
| ·人工合成长链-Arg3IGF1基因 | 第31-32页 |
| ·表达质粒pαA-LR3IGF1的构建 | 第32-35页 |
| ·表达质粒pαA-LR3IGF1转化毕赤酵母菌KM71 | 第35-37页 |
| ·高表达转化子的筛选 | 第37-38页 |
| ·小量诱导表达及表达产物鉴定 | 第38-40页 |
| ·不同诱导发酵条件对表达量的影响 | 第40页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白浓度及纯度分析 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白生物活性鉴定 | 第42-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-50页 |
| ·人工合成长链-Arg~3IGF1基因 | 第43页 |
| ·表达质粒pαA-LR3IGF1的构建 | 第43页 |
| ·电击转化毕赤酵母宿主菌 | 第43-44页 |
| ·PCR鉴定阳性转化子 | 第44-45页 |
| ·高表达转化子的筛选 | 第45页 |
| ·小量诱导表达及表达产物鉴定 | 第45-46页 |
| ·不同诱导条件对蛋白表达量的影响 | 第46-47页 |
| ·不同诱导时间对表达量的影响 | 第46页 |
| ·不同诱导剂(甲醇)剂量对表达量的影响 | 第46-47页 |
| ·不同培养液pH值对表达量的影响 | 第47页 |
| ·重组蛋白纯度分析 | 第47-48页 |
| ·HPLC分析重组蛋白纯度 | 第47-48页 |
| ·BCA测定诱导上清中总蛋白含量 | 第48页 |
| ·重组蛋白生物活性鉴定 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 5 研究结果小结及后续研究 | 第53-55页 |
| ·研究结果小结 | 第53-54页 |
| ·后续研究 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录1.重组人胰岛素样生长因-1的一级结构 | 第64-65页 |
| 附录2. Ppic9K与PpicZαA的比较 | 第65页 |