| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| ·阿特拉津降解基因的研究现状 | 第15-22页 |
| ·阿特拉津降解基因的种类和来源 | 第15-17页 |
| ·模式菌株Pseudomonas sp. ADP 中的降解基因 | 第17-19页 |
| ·阿特拉津氯水解酶基因的自然进化和人工突变 | 第19-20页 |
| ·阿特拉津氯水解酶基因工程菌的构建及应用 | 第20页 |
| ·转抗阿特拉津基因农作物 | 第20-22页 |
| ·研究热点分析 | 第22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 阿特拉津降解菌的鉴定 | 第24-33页 |
| ·材料与方法 | 第24-28页 |
| ·材料与仪器 | 第24-25页 |
| ·菌落培养特征及生化特征鉴定 | 第25页 |
| ·菌株165 rDNA 鉴定 | 第25-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·菌株形态特征 | 第28页 |
| ·菌株生化特性 | 第28-29页 |
| ·菌株165 rDNA 鉴定 | 第29-32页 |
| ·结论与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 阿特拉津降解基因的克隆 | 第33-43页 |
| ·材料与方法 | 第33-37页 |
| ·材料与仪器 | 第33-34页 |
| ·基因组DNA 的提取及检测 | 第34页 |
| ·阿特拉津降解基因保守序列引物的合成 | 第34-35页 |
| ·PCR 操作 | 第35页 |
| ·目的DNA 片段的回收 | 第35页 |
| ·回收的DNA 片段与T 载体重组 | 第35页 |
| ·重组片段的转化及克隆的筛选 | 第35-36页 |
| ·重组子鉴定 | 第36页 |
| ·重组子测序及blast 比对 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-42页 |
| ·BZB-1 菌株中阿特拉津降解基因的克隆 | 第37页 |
| ·X-700 菌株中阿特拉津氯水解酶基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·重组子鉴定结果 | 第38页 |
| ·测序及比对结果 | 第38-42页 |
| ·结论与讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 降解基因的定位及氯水解酶基因读码框序列分析 | 第43-53页 |
| ·材料与方法 | 第43-47页 |
| ·材料与仪器 | 第43-44页 |
| ·BZB-1 降解基因的定位 | 第44-45页 |
| ·阿特拉津氯水解酶全序列克隆 | 第45-46页 |
| ·重组子测序及blast 比对 | 第46页 |
| ·阿特拉津氯水解酶的蛋白序列比对 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·BZB-1 菌株和X-700 菌株质粒的确定 | 第47页 |
| ·PCR 检测降解基因的定位 | 第47-48页 |
| ·氯水解酶基因读码框序列的克隆 | 第48页 |
| ·氯水解酶基因序列的比对分析 | 第48-50页 |
| ·氯水解酶蛋白序列的比对分析 | 第50-52页 |
| ·结论与讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 阿特拉津氯水解酶基因的表达 | 第53-63页 |
| ·材料与方法 | 第53-59页 |
| ·材料与仪器 | 第53-54页 |
| ·合成读码框序列克隆引物 | 第54页 |
| ·PCR 扩增 | 第54-55页 |
| ·PCR 扩增产物目的DNA 片段的回收 | 第55页 |
| ·目的DNA 片段与T 载体重组 | 第55页 |
| ·重组子的鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组子PET-42a-atzA 和表达载体PET-42a 的双酶切 | 第56页 |
| ·目的片段的回收和连接 | 第56-57页 |
| ·表达重组子的构建步骤 | 第57-58页 |
| ·重组PET-42a-atzA 质粒的转化 | 第58页 |
| ·重组表达质粒(PET-42a-atzA)的酶切和测序鉴定 | 第58页 |
| ·阿特拉津氯水解酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-61页 |
| ·温度梯度PCR 结果 | 第59-60页 |
| ·重组T-载体和PET-42a 空载体的酶切 | 第60页 |
| ·重组子PET-42a-atzA 的酶切鉴定结果 | 第60-61页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测结果 | 第61页 |
| ·结论与讨论 | 第61-63页 |
| 第六章 阿特拉津氯水解酶基因表达产物的活力生测 | 第63-68页 |
| ·材料与方法 | 第63-65页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·BZB-1 菌株菌悬液降解效果测定 | 第63-64页 |
| ·BZB-1 菌株粗酶液的降解效果测定 | 第64页 |
| ·工程菌的降解效果测定 | 第64页 |
| ·工程菌粗酶液的降解效果测定 | 第64-65页 |
| ·指示植物的处理 | 第65页 |
| ·生测方案流程 | 第65页 |
| ·数据采集及统计 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-67页 |
| ·结论与讨论 | 第67-68页 |
| 第七章 全文结论与讨论 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
