| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| ·植物的氮源 | 第12页 |
| ·NO_3~-的还原 | 第12-13页 |
| ·NH_4~+的同化 | 第13-21页 |
| ·高等植物GS/GOGAT的研究概况 | 第13-16页 |
| ·高等植物GDH的研究概况 | 第16-21页 |
| ·GDH生化特性及活性变化 | 第16-17页 |
| ·GDH与光呼吸作用的关系 | 第17-18页 |
| ·GDH在碳氮代谢中的作用 | 第18-19页 |
| ·GDH与植物逆境的关系 | 第19页 |
| ·GDH基因克隆 | 第19-21页 |
| ·GDH转基因植物的研究现状 | 第21页 |
| ·植物基因功能研究策略 | 第21-25页 |
| ·生物信息学 | 第22-23页 |
| ·研究基因表达及功能分析的实验方法 | 第23-25页 |
| ·表达序列标签(ESTs) | 第23页 |
| ·Northern杂交、半定量反转录PCR和实时定量PCR | 第23-24页 |
| ·基因芯片技术 | 第24-25页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 3 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·水稻材料及其处理 | 第26页 |
| ·遗传转化的载体与菌株 | 第26-27页 |
| ·生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·遗传转化载体的构建和转化 | 第28-31页 |
| ·超量表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·RNAi抑制表达载体的构建 | 第29页 |
| ·Promoter分析载体的构建 | 第29-31页 |
| ·遗传转化 | 第31页 |
| ·DNA的抽提和Southern杂交 | 第31-32页 |
| ·RNA抽提、RT-PCR、qPCR和Northern杂交 | 第32页 |
| ·转基因植株的种植和性状考察 | 第32-39页 |
| ·苗期水培试验和性状考察 | 第32-33页 |
| ·孕穗期水培试验 | 第33页 |
| ·田间试验和性状考察 | 第33-34页 |
| ·大田低氮胁迫实验 | 第33页 |
| ·大田抗旱性实验 | 第33-34页 |
| ·苗期培养基试验和性状考察 | 第34-36页 |
| ·考察性状的测定 | 第36-39页 |
| ·谷氨酸脱氢酶活性的测定 | 第36-37页 |
| ·水溶性蛋白含量的测定 | 第37-39页 |
| ·SPAD值测定 | 第39页 |
| ·糙米中氮含量的测定方法 | 第39页 |
| ·GFP的表达观察 | 第39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-60页 |
| ·OsGDH基因生物信息学以及表达模式分析 | 第39-52页 |
| ·OsGDH基因分离 | 第39-41页 |
| ·OsGDH基因的进化和蛋白质motif分析 | 第41-44页 |
| ·OsGDH表达谱分析 | 第44-50页 |
| ·用qPCR方法分析苗期缺氮及缺磷条件下OsGDH表达谱 | 第44-45页 |
| ·通过RT-PCR分析OsGDH在正常条件下的表达谱 | 第45-46页 |
| ·用Microarray分析OsGDH全生育期的表达模式 | 第46-48页 |
| ·启动子融合GFP蛋白的转基因植株的获得与分析 | 第48-50页 |
| ·OsGDH的单核苷酸多态性分析 | 第50-52页 |
| ·超量表达OsGDH1、OsGDH4和α-gdhANC转基因植株的获得与功能分析 | 第52-59页 |
| ·转基因植株的获得与鉴定 | 第52-55页 |
| ·基因片段的获得与转化载体的构建 | 第52页 |
| ·转基因植株的获得与鉴定 | 第52-55页 |
| ·转基因植株的种植及其功能验证 | 第55-59页 |
| ·转基因植株的苗期水培种植 | 第55-56页 |
| ·转基因植株谷氨酸脱氢酶活性的测定分析 | 第56-57页 |
| ·转基因植株苗期培养基试验 | 第57页 |
| ·转基因植株孕穗期水培试验 | 第57-59页 |
| ·转基因植株的经济产量及籽粒氮含量的测定分析 | 第59页 |
| ·RNAi抑制表达的转基因植株的获得与鉴定 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-65页 |
| ·关于水稻谷氨酸脱氢酶(GDH)基因功能的探讨 | 第60-62页 |
| ·关于GDH酶活性测定 | 第62-63页 |
| ·关于氮高效利用的转基因水稻新品种培育方法的探讨 | 第63-64页 |
| ·关于后续工作的设想 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录Ⅰ 部分实验的操作流程 | 第77-84页 |
| Protocol 1:Extraction of total DNA with CTAB method | 第77-78页 |
| Protocol 2:TRIzol Reagent RNA Isolation Method | 第78-79页 |
| Protocol 3:RT-PCR(Reverse transcription PCR) | 第79-81页 |
| Protocol 4:Northern Hybridization | 第81-84页 |
| 附录Ⅱ 附表及附图 | 第84-90页 |
| 附表1 来源于不同物种谷氨酸脱氢酶信息 | 第84-86页 |
| 附表2 OsGDH在不同品种中差异表达 | 第86-87页 |
| 附图1 PF02812和整个蛋白质序列进化树 | 第87-88页 |
| 附图2 MEME对GDH蛋白结构分析结果 | 第88页 |
| 附图3 层次聚类分析野生型拟南芥Affymetrix(ATH1)芯片中编码谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酸合成酶(GOGAT)和谷氨酸脱氢酶(GDH)基因 | 第88-90页 |
| 附录Ⅲ 简历 | 第90页 |
