| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-21页 |
| 1.CD3分子的研究概况 | 第14-18页 |
| ·CD3分子结构 | 第14-15页 |
| ·CD3基因结构 | 第15页 |
| ·CD3分子的功能 | 第15-16页 |
| ·CD3抗体的应用 | 第16-17页 |
| ·CD3分子在禽类外周血液中的研究 | 第17-18页 |
| 2 鸭瘟概况 | 第18-19页 |
| ·鸭瘟的发展历史 | 第18-19页 |
| ·鸭瘟的流行病学概况 | 第19页 |
| 3 鸭瘟在发病机制方面的研究概况 | 第19-21页 |
| 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 材料与方法 | 第22-45页 |
| 1 材料 | 第22-28页 |
| ·载体及菌株 | 第22-23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-27页 |
| ·抗生素类 | 第23-24页 |
| ·细菌培养基 | 第24页 |
| ·RNA提取相关溶液 | 第24页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第24页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第25页 |
| ·Western-blotting相关溶液 | 第25-26页 |
| ·表达提取纯化表达蛋白的相关溶液 | 第26页 |
| ·多克隆抗体的相关溶液 | 第26-27页 |
| ·构建鸭瘟病理模型相关溶液 | 第27页 |
| ·外周血液中CD3~+T淋巴细胞测定相关溶液 | 第27页 |
| ·其它试剂 | 第27页 |
| ·主要的仪器设备 | 第27页 |
| ·其他试剂 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-45页 |
| ·樱桃谷鸭和麻鸭CD3εORF序列测定及分析 | 第28-34页 |
| ·樱桃谷鸭和麻鸭脾脏中总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·RT-PCR反应体系 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR产物的电泳检测 | 第30页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备(氯化钙法) | 第32页 |
| ·质粒的转化 | 第32-33页 |
| ·质粒的制备(碱裂解法) | 第33-34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·樱桃谷鸭和麻鸭CD3 ORF序列分析 | 第34页 |
| ·樱桃谷鸭CD3ε胞外区的原核表达 | 第34-38页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的表达提取 | 第36页 |
| ·包涵体的制备 | 第36页 |
| ·包涵体的纯化与复性 | 第36-37页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定 | 第37-38页 |
| ·抗樱桃谷鸭CD3ε多克隆抗体的制备 | 第38-42页 |
| ·抗原的制备及纯化 | 第38页 |
| ·免疫原的乳化 | 第38页 |
| ·家兔的免疫 | 第38-39页 |
| ·间接ELISA检测抗樱桃谷鸭CD3ε血清效价 | 第39页 |
| ·兔抗rDuCD3εIgG的粗提与纯化 | 第39-41页 |
| ·兔抗rDuCD3εIgG的SDS-PAGE电泳 | 第41页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第41-42页 |
| ·鸭瘟病理模型的复制 | 第42-43页 |
| ·毒株准备 | 第42页 |
| ·动物感染 | 第42页 |
| ·临床症状的观察 | 第42页 |
| ·免疫器官的HE染色观察 | 第42-43页 |
| ·脾脏透射电镜观察 | 第43页 |
| ·血涂片的制作 | 第43页 |
| ·鸭瘟病毒感染鸭外周血液中CD3~+T淋巴细胞变化测定 | 第43-45页 |
| ·检测方法 | 第43-44页 |
| ·结果判定 | 第44-45页 |
| 结果与分析 | 第45-58页 |
| 1.樱桃谷鸭和麻鸭CD3εORF基因的测定和序列分析 | 第45-50页 |
| ·樱桃谷鸭和麻鸭CD3εORF基因的RT-PCR扩增结果 | 第45-46页 |
| ·樱桃谷鸭和麻鸭CD3εORF基因的克隆与鉴定 | 第46-47页 |
| ·樱桃谷鸭和麻鸭CD3εORF基因的序列测定与分析 | 第47-50页 |
| 2.樱桃谷鸭CD3ε胞外区的原核表达 | 第50-52页 |
| ·重组质粒pET-28a-DuCD3ε的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白表达产物的SDS-PAGE分析结果 | 第51页 |
| ·重组蛋白表达产物的Western-blotting鉴定结果 | 第51-52页 |
| 3.抗樱桃谷鸭CD3ε链胞外区蛋白多克隆抗体的制备 | 第52-53页 |
| ·免疫兔血清效价的测定结果 | 第52页 |
| ·兔抗HIS-rDuCD3εIgG的纯化结果 | 第52-53页 |
| ·兔抗rRDuCD3εIgG纯化的SDS-PAGE结果 | 第53页 |
| ·兔抗rRDuCD3εIgG纯化后的浓度 | 第53页 |
| 4.鸭瘟病理模型的复制 | 第53-56页 |
| ·毒力测定 | 第53-54页 |
| ·临床症状 | 第54页 |
| ·剖检病理学变化 | 第54-55页 |
| ·人工感染鸭瘟强毒后鸭免疫器官的病理学变化 | 第55-56页 |
| ·脾脏组织病理变化 | 第55页 |
| ·法氏囊组织病理变化 | 第55-56页 |
| ·胸腺组织病理变化 | 第56页 |
| ·脾脏透射电镜的观察 | 第56页 |
| 5.感染鸭外周血液中CD3~+T淋巴细胞数量的检测结果 | 第56-58页 |
| ·CD3~+T淋巴细胞SABC方法观察结果 | 第56-57页 |
| ·外周血液CD3~+T淋巴细胞统计学结果 | 第57-58页 |
| 讨论 | 第58-65页 |
| 1.麻鸭和樱桃谷鸭CD3εORF序列测定及对比分析 | 第58-59页 |
| ·RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·麻鸭和樱桃谷鸭CD3εORF的序列分析 | 第59页 |
| 2.樱桃谷鸭CD3ε胞外区的原核表达 | 第59-60页 |
| ·表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·蛋白表达产物的纯化 | 第60页 |
| 3.兔抗rDuCD3ε抗体的制备 | 第60-61页 |
| 4.鸭瘟病理模型的复制 | 第61-63页 |
| ·临床症状及剖检变化 | 第61页 |
| ·免疫器官病理组织学变化 | 第61-62页 |
| ·透射电镜对脾脏中病毒粒子的观察 | 第62-63页 |
| 5.外周血液中CD3~+T淋巴细胞变化 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
