| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-45页 |
| 第一节 HIV的研究概况 | 第15-26页 |
| ·AIDS的病原学 | 第15-23页 |
| ·HIV的致病机理 | 第23-24页 |
| ·HIV的免疫应答 | 第24-26页 |
| 第二节 AIDS疫苗研究概况 | 第26-41页 |
| ·AIDS疫苗发展策略 | 第27-38页 |
| ·中国AIDS疫苗研究 | 第38-41页 |
| 第三节 本研究的目的和意义 | 第41-45页 |
| ·AIDS疫苗评价的动物模型 | 第41页 |
| ·SHIV的研究进展 | 第41-43页 |
| ·立题依据及研究意义 | 第43-45页 |
| 第二章 材料与方法 | 第45-82页 |
| 第一节 实验材料 | 第45-52页 |
| ·质粒 | 第45-46页 |
| ·主要工具酶 | 第46页 |
| ·主要生化试剂及溶液的配制 | 第46-47页 |
| ·试剂盒 | 第47-48页 |
| ·HIV标本来源及亚型分类 | 第48页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·细胞 | 第48-49页 |
| ·耗材 | 第49页 |
| ·主要仪器和设备 | 第49-50页 |
| ·抗体 | 第50页 |
| ·主要生物软件和分析工具 | 第50-52页 |
| 第二节 实验方法 | 第52-82页 |
| ·文中使用的SHIV感染性分子克隆及本课题的构建方案设计 | 第52-54页 |
| ·HIV感染者基因组DNA提取及目的基因扩增 | 第54-56页 |
| ·HIV感染者基因组DNA的提取 | 第54-55页 |
| ·目的基因的扩增 | 第55-56页 |
| ·SHIV cDNA克隆的构建 | 第56-59页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第56-57页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第57页 |
| ·质粒的小量提取 | 第57-58页 |
| ·半长SHIV克隆的筛选和鉴定 | 第58页 |
| ·全长SHIV克隆的构建和鉴定 | 第58页 |
| ·全长SHIV克隆的特殊培养条件 | 第58-59页 |
| ·全长SHIV质粒的大量制备 | 第59页 |
| ·细胞培养 | 第59-61页 |
| ·在细胞水平具有感染活性的SHIV cDNA克隆的筛选 | 第61-68页 |
| ·SHIV质粒转染293T细胞系 | 第61-62页 |
| ·SHIV病毒P27浓度测定 | 第62-63页 |
| ·SHIV病毒在TZM细胞中的复制 | 第63页 |
| ·SHIV病毒TCID_(50)滴定(TZM-bl细胞系) | 第63-64页 |
| ·SHIV在恒河猴PBMC中的复制 | 第64页 |
| ·SHIV在人PBMC中的复制 | 第64-65页 |
| ·恒河猴CD4~+T细胞的分离 | 第65-66页 |
| ·基因组DNA的提取及DNA-PCR | 第66-67页 |
| ·病毒颗粒电镜照片观察 | 第67页 |
| ·细胞嗜性测定 | 第67-68页 |
| ·感染细胞病变观察 | 第68页 |
| ·SHIV-XJDC6431亚型分类 | 第68页 |
| ·猴体动物实验 | 第68-71页 |
| ·恒河猴的准备 | 第68-70页 |
| ·恒河猴的病毒接种 | 第70-71页 |
| ·样品的采集和处理 | 第71页 |
| ·SHIV-XJDC6431病毒感染恒河猴后病毒学指标检测 | 第71-80页 |
| ·SHIV病毒RNA载量测定 | 第71-75页 |
| ·SHIV病毒感染恒河猴后细胞学指标检测 | 第75页 |
| ·SHIV病毒分离 | 第75页 |
| ·SHIV病毒在猴体内的核酸鉴定及序列分析 | 第75-80页 |
| ·SHIV-XJDC6431病毒感染恒河猴后特异性结合抗体滴度测定 | 第80-82页 |
| 第三章 结果与分析 | 第82-117页 |
| 第一节 表达中国HIV-1毒株env基因的SHIV构建 | 第82-92页 |
| ·全长SHIV克隆的构建流程 | 第82-83页 |
| ·外源片断目的基因的获得 | 第83-85页 |
| ·从血样中获得HIV-1 env基因的半长SHIV克隆的筛选和鉴定 | 第85-88页 |
| ·从质粒中获得HIV-1 env基因的半长SHIV克隆的筛选和鉴定 | 第88-89页 |
| ·携带不同中国HIV-1毒株env基因的全长SHIV克隆的构建和鉴定 | 第89-91页 |
| ·包含中国HIV-XJDC6431毒株env基因的全长SHIV克隆的构建和鉴定 | 第91-92页 |
| 第二节 细胞水平筛选有复制能力的SHIV全长克隆及部分SHIV毒株体外感染活性的比较 | 第92-110页 |
| ·在TZM细胞中具有感染能力SHIV的筛选 | 第92-95页 |
| ·在恒河猴淋巴细胞中筛选具有感染能力的SHIV病毒 | 第95-97页 |
| ·SHIV病毒在人淋巴细胞(PBMC)中复制能力的检测 | 第97-99页 |
| ·SHIV-XJDC6431在细胞水平生物学活性分析 | 第99-110页 |
| ·SHIV-XJDC6431病毒颗粒的电镜观察 | 第99-101页 |
| ·SHIV-XJDC6431的细胞嗜性检测 | 第101-103页 |
| ·SHIV-XJDC6431在恒河猴PBMC中的细胞病变观察 | 第103-105页 |
| ·SHIV-XJDC6431与多株SHIV嵌合病毒在恒河猴CD4~+淋巴细胞中的感染活性比较 | 第105-106页 |
| ·DNA PCR检测SHIV在猴CD4~+T细胞中的整合 | 第106-107页 |
| ·SHIV-XJDC6431与多株SHIV嵌合病毒在人淋巴细胞中的感染活性比较 | 第107页 |
| ·SHIV-XJDC6431的亚型分类及env区的序列分析 | 第107-110页 |
| 第三节 SHIV-XJDC6431在恒河猴体内感染活性的检测 | 第110-117页 |
| ·SHIV-XJDC6431病毒颗粒的制备 | 第110页 |
| ·攻毒实验中使用恒河猴的筛选 | 第110-111页 |
| ·感染途径及观察指标 | 第111页 |
| ·血浆SHIV-XJDC6431病毒RNA载量检测 | 第111-112页 |
| ·CD4细胞计数和CD4/CD8比值分析 | 第112-113页 |
| ·SHIV-XJDC6431感染后病毒的cDNA PCR鉴定 | 第113-114页 |
| ·血清中HIV-1特异性结合抗体检测 | 第114-115页 |
| ·SHIV-XJDC6431在猴体内的传代实验 | 第115-117页 |
| 第四章 讨论 | 第117-133页 |
| 第一节 人类的无奈选择—人造病毒SHIV | 第117-127页 |
| ·具有代表性SHIV的总结 | 第117-123页 |
| ·SHIV嵌合病毒在恒河猴模型中的应用 | 第123-127页 |
| 第二节 得到感染性SHIV嵌合病毒成功的关键 | 第127-131页 |
| ·SHIV病毒骨架及HIV-1外源片断的选择 | 第127-129页 |
| ·恒河猴种属差异及病毒—宿主关系 | 第129-130页 |
| ·病毒在体内的适应过程—通过猴体传代得到致病株 | 第130-131页 |
| 第三节 SHIV的发展何去何从 | 第131-133页 |
| 第五章 结论 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
| 附录 | 第154-157页 |
