| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| ·脂肪酶 | 第11-14页 |
| ·脂肪酶简介 | 第11页 |
| ·脂肪酶催化 | 第11页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶B 介绍 | 第11-13页 |
| ·脂肪酶应用 | 第13-14页 |
| ·固定化脂肪酶技术 | 第14-16页 |
| ·固定化脂肪酶优点 | 第14页 |
| ·固定化方法 | 第14-16页 |
| ·酵母细胞表面展示系统介绍 | 第16-21页 |
| ·酵母表面展示的理论基础 | 第16-17页 |
| ·酵母表面展示系统类型 | 第17-19页 |
| ·酵母表面展示系统的应用 | 第19-21页 |
| ·工程菌发酵工艺综述 | 第21-27页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·培养条件 | 第22-24页 |
| ·补料工艺 | 第24-27页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第27-30页 |
| ·现阶段的主要问题 | 第27-28页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第28页 |
| ·本研究的技术路线 | 第28-29页 |
| ·本研究的意义 | 第29-30页 |
| 第二章 CALB基因的克隆及表达载体的构建 | 第30-42页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·菌株及质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·培养基及常用溶液配制 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-38页 |
| ·CALB 基因密码子优化及引物设计 | 第32-33页 |
| ·CALB 基因的获取 | 第33-35页 |
| ·构建重组质粒 | 第35-37页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第37-38页 |
| ·重组质粒的验证 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·calb 基因密码子优化结果 | 第38-40页 |
| ·CALB 基因梯度 PCR 结果 | 第40页 |
| ·载体质粒与目的基因双酶切后琼脂糖凝胶电泳结果 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 CALB重组质粒在 EBY100中的表达 | 第42-51页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株及质粒 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·培养基配制 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·酿酒酵母感受态制备 | 第43-44页 |
| ·空质粒pYD1、重组质粒pYD1-CALB 分别转化 EBY100 | 第44页 |
| ·重组菌株菌落PCR 验证 | 第44-45页 |
| ·重组子的筛选 | 第45页 |
| ·表达产物酶活测定 | 第45-46页 |
| ·半乳糖诱导脂肪酶基因在酿酒酵母中的表达 | 第46-47页 |
| ·遗传稳定性检测 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-49页 |
| ·重组酵母菌落PCR 结果 | 第47-48页 |
| ·重组子的筛选 | 第48页 |
| ·重组酵母的酶活测定 | 第48-49页 |
| ·酵母转化子的遗传稳定性分析 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-51页 |
| 第四章 工业化培养基发酵及优化 | 第51-59页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·菌种和培养基 | 第51-52页 |
| ·菌种 | 第51页 |
| ·培养基配制 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·菌种活化 | 第52页 |
| ·工程菌的种子液制备 | 第52页 |
| ·DNS 法测定葡萄糖浓度 | 第52-53页 |
| ·pH、溶解氧、温度的在线检测 | 第53-54页 |
| ·工程菌的发酵罐培养及目的蛋白的诱导表达优化 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-57页 |
| ·接种量对酵母生长的影响 | 第55-56页 |
| ·温度对酶活影响 | 第56页 |
| ·批次补料发酵试验 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 结论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读博士/硕士学位期间取得的研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |