| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-31页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第16-18页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第16-17页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第17页 |
| ·脂肪酶的性质 | 第17页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第17-18页 |
| ·微生物脂肪酶研究进展 | 第18-20页 |
| ·微生物脂肪酶的来源 | 第18-19页 |
| ·微生物脂肪酶发酵生产研究进展 | 第19-20页 |
| ·酵母表面展示系统的研究进展 | 第20-21页 |
| ·酵母表面展示系统简介 | 第20-21页 |
| ·酵母展示系统的应用 | 第21页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶B 的研究进展 | 第21-24页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶B 简介 | 第21页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶B 分子结构 | 第21-22页 |
| ·CALB 催化的非特异性与立体选择性 | 第22-23页 |
| ·CALB 的应用研究 | 第23-24页 |
| ·酵母展示CALB 的研究进展 | 第24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白及发酵优化研究进展 | 第24-29页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的生物学特性 | 第24-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第25-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母发酵优化的研究进展 | 第26-29页 |
| ·本课题研究的意义及主要内容 | 第29-31页 |
| ·本课题研究的意义 | 第29页 |
| ·本课题研究的内容 | 第29-31页 |
| 第二章 重组毕赤酵母KFS-CALB-GS115 摇瓶水平BMGY/BMMY 培养基及发酵条件优化 | 第31-46页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料与设备 | 第31-34页 |
| ·主要仪器和设备 | 第31-32页 |
| ·实验菌种 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·溶液与培养基 | 第33-34页 |
| ·培养基的配置 | 第33-34页 |
| ·溶液的配制 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·培养方法 | 第34-36页 |
| ·菌种保藏 | 第34页 |
| ·YPD 平板活化菌种 | 第34-35页 |
| ·YPD 种子液培养 | 第35页 |
| ·BMGY 菌体富集培养 | 第35页 |
| ·BMMY 诱导培养 | 第35页 |
| ·冻干全细胞催化剂制备 | 第35页 |
| ·重组毕赤酵母KFS-CALB-GS115 全细胞催化合成己酸乙酯反应 | 第35页 |
| ·pNP 标准曲线的绘制 | 第35-36页 |
| ·参数检测及分析方法 | 第36-37页 |
| ·细胞密度的测定 | 第36页 |
| ·CALB 水解活力测定 | 第36页 |
| ·重组毕赤酵母KFS-CALB-GS115 全细胞催化合成己酸乙酯检测 | 第36页 |
| ·重组毕赤酵母KFS-CALB-GS115 胞壁蛋白的提取 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第36-37页 |
| ·实验结果与讨论 | 第37-44页 |
| ·pNP 标准曲线的绘制 | 第37-38页 |
| ·重组毕赤酵母 KFS-CALB-GS115 的摇瓶水平 BMGY/BMMY 培养基优化 | 第38-39页 |
| ·BMGY 培养基中甘油含量对KFS-CALB-GS115 生长的影响 | 第38页 |
| ·BMMY 培养基中甲醇含量对KFS-CALB-GS115 产酶的影响 | 第38-39页 |
| ·重组毕赤酵母KFS-CALB-GS115 摇瓶水平培养条件优化 | 第39-42页 |
| ·接种量对KFS-CALB-GS115 产酶的影响 | 第39-40页 |
| ·装液量对KFS-CALB-GS115 产酶的影响 | 第40-41页 |
| ·转速对KFS-CALB-GS115 产酶的影响 | 第41页 |
| ·初始pH 值对KFS-CALB-GS115 产酶的影响 | 第41-42页 |
| ·培养基及发酵条件优化后KFS-CALB-GS115 的水解及合成活力验证 | 第42-44页 |
| ·培养基及发酵条件优化后的KFS-CALB-GS115 水解活力验证 | 第42-43页 |
| ·培养基及发酵条件优化后KFS-CALB-GS115 的合成活力验证 | 第43-44页 |
| ·培养基及发酵条件优化后胞壁蛋白的SDS-PAGE 对比 | 第44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 重组毕赤酵母KNS-CALB-GS115 摇瓶水平的BSM 培养基及发酵条件优化 | 第46-58页 |
| ·引言 | 第46-47页 |
| ·实验材料与设备 | 第47-48页 |
| ·主要仪器和设备 | 第47页 |
| ·实验菌种 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| ·溶液与培养基 | 第48页 |
| ·培养基的配置 | 第48页 |
| ·溶液的配制 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·培养方法 | 第48-49页 |
| ·菌种保藏 | 第48页 |
| ·YPD 平板活化菌种 | 第48页 |
| ·YPD 种子液培养 | 第48页 |
| ·BSM 摇瓶培养 | 第48页 |
| ·多功能补料摇床培养 | 第48-49页 |
| ·参数检测及分析方法 | 第49页 |
| ·细胞密度的测定 | 第49页 |
| ·CALB 水解活力测定 | 第49页 |
| ·甘油残量测定方法 | 第49页 |
| ·pH 值在线测量 | 第49页 |
| ·实验结果与讨论 | 第49-56页 |
| ·KFS-CALB-GS115 与KNS-CALB-GS115 合成活力对比 | 第49-50页 |
| ·BSM 培养基主要成分优化 | 第50-53页 |
| ·BSM 培养基中硫酸铵含量对KNS-CALB-GS115 生长的影响 | 第50-51页 |
| ·BSM 培养基中Ca2+含量对KNS-CALB-GS115 生长的影响 | 第51页 |
| ·BSM 培养基中PTM1 含量对KNS-CALB-GS115 生长的影响 | 第51-52页 |
| ·BSM 培养基中甘油含量对KNS-CALB-GS115 生长的影响 | 第52-53页 |
| ·BSM 培养基条件下KNS-CALB-GS115 发酵条件优化 | 第53-56页 |
| ·BSM 培养基条件下KNS-CALB-GS115 生长最适温度研究 | 第53-54页 |
| ·BSM 培养基条件下KNS-CALB-GS115 生长最适pH 值研究 | 第54页 |
| ·BSM 培养基条件下KNS-CALB-GS115 最适产酶温度的研究 | 第54-55页 |
| ·BSM 培养基条件下KNS-CALB-GS115 最适产酶pH 的研究 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 重组毕赤酵母KNS-CALB-GS115 发酵罐高密度发酵优化 | 第58-70页 |
| ·引言 | 第58-59页 |
| ·实验材料与设备 | 第59-60页 |
| ·主要仪器和设备 | 第59页 |
| ·实验菌种 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·溶液与培养基 | 第59-60页 |
| ·培养基的配置 | 第59页 |
| ·溶液的配制 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·培养方法 | 第60-61页 |
| ·菌种保藏 | 第60页 |
| ·YPD 平板活化菌种 | 第60页 |
| ·YPD 种子液培养 | 第60页 |
| ·2L 发酵罐培养 | 第60页 |
| ·50L 发酵罐扩大培养 | 第60-61页 |
| ·检测方法 | 第61页 |
| ·细胞密度的测定 | 第61页 |
| ·CALB 水解活力测定 | 第61页 |
| ·pH 值在线测量 | 第61页 |
| ·细胞表面荧光强度检测 | 第61页 |
| ·实验结果与讨论 | 第61-68页 |
| ·BSM 优化培养基和培养条件在2L 发酵罐上的验证 | 第61-63页 |
| ·BSM 原培养基和原培养条件在2L 发酵罐上的发酵 | 第61-62页 |
| ·BSM 优化条件和原条件在2L 发酵罐上的发酵 | 第62-63页 |
| ·2L 发酵罐下甘油分批补料培养阶段甘油流加模式优化 | 第63-65页 |
| ·不同甘油流速对重组毕赤酵母KNS-CALB-GS115 生长的影响 | 第63-64页 |
| ·不同甘油流加时间对重组毕赤酵母 KNS-CALB-GS115 产酶的影响 | 第64-65页 |
| ·2L 发酵罐下甲醇流加模式对KNS-CALB-GS115 产酶的影响 | 第65-66页 |
| ·重组毕赤酵母KNS-CALB-GS115 发酵优化前后结果对比 | 第66页 |
| ·重组毕赤酵母KNS-CALB-GS115 细胞表面荧光强度检测 | 第66-67页 |
| ·重组毕赤酵母KNS-CALB-GS115 全细胞催化合成己酸乙酯 | 第67-68页 |
| ·本章小结 | 第68-70页 |
| 结论与展望 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 攻读博士/硕士学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
