摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
前言 | 第11-12页 |
第1章 LIM蛋白家族的研究进展 | 第12-18页 |
1.1 LIM家族的功能结构及分类 | 第12-14页 |
1.1.1 LIM激酶(LIMdomainkinase,LIM-K) | 第12-13页 |
1.1.2 仅包含LIM结构域的蛋白(LIM-Only,LIMO) | 第13页 |
1.1.3 LIM-同形域蛋白(LIMhomeodomain,LIM-HD) | 第13-14页 |
1.2 Lhx2基因研究进展 | 第14-18页 |
1.2.1 Lhx2基因的结构和功能 | 第14-15页 |
1.2.2 Lhx2基因对毛囊的影响 | 第15-16页 |
1.2.3 Lhx2基因与信号通路 | 第16-18页 |
第2章 藏系绵羊LHX2基因克隆与真核表达载体的构建 | 第18-30页 |
2.1 材料与方法 | 第18-24页 |
2.1.1 试验样品 | 第18页 |
2.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
2.1.4 引物设计 | 第20页 |
2.1.5 藏系绵羊皮肤总RNA提取 | 第20-21页 |
2.1.6 藏系绵羊Lhx2基因的克隆及序列分析 | 第21-22页 |
2.1.7 Lhx2基因双酶切引物设计 | 第22页 |
2.1.8 含酶切位点Lhx2基因扩增和pCDsRed2-KI载体的扩大培养 | 第22-23页 |
2.1.9 重组质粒pCDsR-KL的构建及鉴定 | 第23-24页 |
2.2 结果 | 第24-28页 |
2.2.1 Lhx2基因的PCR扩增和克隆 | 第24-26页 |
2.2.2 Lhx2基因扩增、pCDsRed2-KI载体的扩大培养 | 第26-27页 |
2.2.3 重组质粒pCDsRed2-KL的鉴定和测序 | 第27-28页 |
2.3 讨论 | 第28-30页 |
第3章 藏系绵羊LHX2MIRNA干扰载体的构建 | 第30-40页 |
3.1 材料与方法 | 第30-34页 |
3.1.1 质粒 | 第30-31页 |
3.1.2 主要试剂 | 第31页 |
3.1.3 主要仪器 | 第31-32页 |
3.1.4 干扰片段设计 | 第32页 |
3.1.5 核苷酸双链制备及干扰载体的构建 | 第32-33页 |
3.1.6 干扰载体菌液PCR鉴定及测序 | 第33-34页 |
3.2 结果 | 第34-38页 |
3.2.1 Lhx2基因靶向miRNA干扰序列的设计结果 | 第34-36页 |
3.2.2 干扰载体菌液PCR结果 | 第36页 |
3.2.3 干扰载体的测序及质粒提取 | 第36-38页 |
3.3 讨论 | 第38-40页 |
第4章 细胞转染及检测 | 第40-62页 |
4.1 材料与方法 | 第40-48页 |
4.1.1 质粒和细胞 | 第40-41页 |
4.1.2 主要试剂 | 第41页 |
4.1.3 主要仪器 | 第41-42页 |
4.1.4 人内根鞘细胞培养 | 第42页 |
4.1.5 质粒转染HHFIRSC | 第42-43页 |
4.1.6 人内根鞘细胞转染后的RNA及蛋白质提取 | 第43-44页 |
4.1.7 目的基因荧光定量PCR分析 | 第44-48页 |
4.2 结果 | 第48-59页 |
4.2.1 细胞转染结果 | 第48-51页 |
4.2.2 细胞转染后的RNA及蛋白质提取 | 第51-52页 |
4.2.3 过表达实验组HHFIRSC基因和蛋白表达检测 | 第52-56页 |
4.2.4 HHFIRSC转染干扰载体后基因和蛋白表达检测 | 第56-59页 |
4.3 讨论 | 第59-62页 |
结论 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-73页 |
附录 :攻读硕士学位期间发表的论文 | 第73-74页 |
致谢 | 第74页 |