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藏系绵羊Lhx2基因皮肤特异表达载体和干扰载体的构建及功能初步分析

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
前言第11-12页
第1章 LIM蛋白家族的研究进展第12-18页
    1.1 LIM家族的功能结构及分类第12-14页
        1.1.1 LIM激酶(LIMdomainkinase,LIM-K)第12-13页
        1.1.2 仅包含LIM结构域的蛋白(LIM-Only,LIMO)第13页
        1.1.3 LIM-同形域蛋白(LIMhomeodomain,LIM-HD)第13-14页
    1.2 Lhx2基因研究进展第14-18页
        1.2.1 Lhx2基因的结构和功能第14-15页
        1.2.2 Lhx2基因对毛囊的影响第15-16页
        1.2.3 Lhx2基因与信号通路第16-18页
第2章 藏系绵羊LHX2基因克隆与真核表达载体的构建第18-30页
    2.1 材料与方法第18-24页
        2.1.1 试验样品第18页
        2.1.2 主要试剂第18-19页
        2.1.3 主要仪器第19-20页
        2.1.4 引物设计第20页
        2.1.5 藏系绵羊皮肤总RNA提取第20-21页
        2.1.6 藏系绵羊Lhx2基因的克隆及序列分析第21-22页
        2.1.7 Lhx2基因双酶切引物设计第22页
        2.1.8 含酶切位点Lhx2基因扩增和pCDsRed2-KI载体的扩大培养第22-23页
        2.1.9 重组质粒pCDsR-KL的构建及鉴定第23-24页
    2.2 结果第24-28页
        2.2.1 Lhx2基因的PCR扩增和克隆第24-26页
        2.2.2 Lhx2基因扩增、pCDsRed2-KI载体的扩大培养第26-27页
        2.2.3 重组质粒pCDsRed2-KL的鉴定和测序第27-28页
    2.3 讨论第28-30页
第3章 藏系绵羊LHX2MIRNA干扰载体的构建第30-40页
    3.1 材料与方法第30-34页
        3.1.1 质粒第30-31页
        3.1.2 主要试剂第31页
        3.1.3 主要仪器第31-32页
        3.1.4 干扰片段设计第32页
        3.1.5 核苷酸双链制备及干扰载体的构建第32-33页
        3.1.6 干扰载体菌液PCR鉴定及测序第33-34页
    3.2 结果第34-38页
        3.2.1 Lhx2基因靶向miRNA干扰序列的设计结果第34-36页
        3.2.2 干扰载体菌液PCR结果第36页
        3.2.3 干扰载体的测序及质粒提取第36-38页
    3.3 讨论第38-40页
第4章 细胞转染及检测第40-62页
    4.1 材料与方法第40-48页
        4.1.1 质粒和细胞第40-41页
        4.1.2 主要试剂第41页
        4.1.3 主要仪器第41-42页
        4.1.4 人内根鞘细胞培养第42页
        4.1.5 质粒转染HHFIRSC第42-43页
        4.1.6 人内根鞘细胞转染后的RNA及蛋白质提取第43-44页
        4.1.7 目的基因荧光定量PCR分析第44-48页
    4.2 结果第48-59页
        4.2.1 细胞转染结果第48-51页
        4.2.2 细胞转染后的RNA及蛋白质提取第51-52页
        4.2.3 过表达实验组HHFIRSC基因和蛋白表达检测第52-56页
        4.2.4 HHFIRSC转染干扰载体后基因和蛋白表达检测第56-59页
    4.3 讨论第59-62页
结论第62-63页
参考文献第63-73页
附录 :攻读硕士学位期间发表的论文第73-74页
致谢第74页

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