| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 IDH1简介 | 第13-16页 |
| 1.1.1 IDH突变的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 IDH的功能 | 第13-14页 |
| 1.1.3 IDH突变与肿瘤的关系 | 第14-16页 |
| 1.2 PTEN简介 | 第16-20页 |
| 1.2.1 PTEN结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 PTEN的功能 | 第17页 |
| 1.2.3 PTEN在蛋白水平的调控 | 第17-19页 |
| 1.2.4 PTEN在转录水平的调控 | 第19-20页 |
| 1.2.5 PTEN受mirco RNA的调控 | 第20页 |
| 1.3 PI3K/Akt信号通路与PTEN的关系 | 第20-22页 |
| 1.4 Akt和SREBP的关系 | 第22-25页 |
| 1.5 SREBP与脂肪代谢 | 第25-26页 |
| 1.6 立题背景 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-47页 |
| 2.1 质粒载体 | 第27-29页 |
| 2.1.1 PcDNA 3.3载体 | 第27页 |
| 2.1.2 PBoBi CS 2.0载体 | 第27-28页 |
| 2.1.3 PLKO.1载体 | 第28-29页 |
| 2.1.4 PGEX 4T-1载体 | 第29页 |
| 2.2 克隆 | 第29-35页 |
| 2.2.1 感受态的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第30-31页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳分离DNA,鉴定片段大小 | 第31页 |
| 2.2.4 DNA片段回收 | 第31-32页 |
| 2.2.5 DNA连接 | 第32-33页 |
| 2.2.6 DNA转化 | 第33页 |
| 2.2.7 少量提取质粒 | 第33页 |
| 2.2.8 中等规模提取质粒 | 第33-34页 |
| 2.2.9 大量提取质粒(CsCl密度梯度离心) | 第34-35页 |
| 2.3 细胞培养与细胞转染 | 第35-37页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第35-36页 |
| 2.3.2 磷酸钙转染 | 第36页 |
| 2.3.3 病毒包装与感染 | 第36-37页 |
| 2.4 蛋白质相关实验 | 第37-39页 |
| 2.4.1 免疫共沉淀 | 第37-38页 |
| 2.4.2 样品制备与Western blot | 第38-39页 |
| 2.5 油红染色 | 第39页 |
| 2.6 实时定量荧光PCR | 第39-42页 |
| 2.6.1 RNA样品的抽提 | 第40页 |
| 2.6.2 RNA的纯度检测及浓度测定 | 第40页 |
| 2.6.3 mRNA逆转录 | 第40-41页 |
| 2.6.4 Real-time PCR样品制备与上机 | 第41-42页 |
| 2.7 NMR测定2-HG含量 | 第42页 |
| 2.8 GC-MS测定2-HG含量 | 第42页 |
| 2.9 GC-MS测定脂肪酸 | 第42-43页 |
| 2.9.1 细胞脂肪酸测定 | 第42-43页 |
| 2.9.2 细胞脂肪酸测定 | 第43页 |
| 2.10 小鼠肝内脂肪酸测定 | 第43页 |
| 2.11 小鼠基因型鉴定 | 第43-44页 |
| 2.12 实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.13 试验数据处理 | 第45-47页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第47-63页 |
| 3.1 IDH1 R132Q突变型小鼠基因型鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2 IDH1 R132Q突变型小鼠中脂肪组织减少 | 第48-49页 |
| 3.3 IDH R132Q突变体小鼠肝脏中Akt在Ser473位点的磷酸化水平下调明显 | 第49页 |
| 3.4 Akt上游PTEN的蛋白水平明显上调 | 第49-50页 |
| 3.5 PTEN蛋白上调不受IDH1的直接作用 | 第50-51页 |
| 3.6 PTEN的蛋白上调是由D-2HG引起从而下调Akt的磷酸化 | 第51-54页 |
| 3.7 PTEN在mRNA水平被调控 | 第54-56页 |
| 3.8 D-2HG通过调控miR-32来调控PTEN的mRNA水平 | 第56-57页 |
| 3.9 IDH1 R132Q突变体小鼠肝脏中脂肪酸、甘油三酯含量明显减少 | 第57-58页 |
| 3.10 SREBP-1c蛋白水平在IDH1突变体小鼠肝脏中明显下调 | 第58页 |
| 3.11 Akt1调控SREBP-1c的蛋白水平 | 第58-60页 |
| 3.12 SREBP-1c下游的靶基因转录水平下调 | 第60页 |
| 3.13 HT1080细胞敲低IDH1之后,相关的脂肪酸被上调 | 第60-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
