| 英文缩略词表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 前言 | 第21-32页 |
| 一、乳腺癌的概述 | 第21-22页 |
| 二、Neμropilin-1简介 | 第22-28页 |
| 1 NRP-1的基因及蛋白结构 | 第22-23页 |
| 2 NRP-1的共受体 | 第23-27页 |
| 2.1 Plexins | 第24页 |
| 2.2 VEGFRs | 第24-25页 |
| 2.3 整合素 | 第25页 |
| 2.4 TGFR | 第25-26页 |
| 2.5 c-met | 第26页 |
| 2.6 PDGFR | 第26-27页 |
| 2.7 EGFR | 第27页 |
| 3 NRP-1在肿瘤中的表达及作用 | 第27-28页 |
| 3.1 NRP-1在肿瘤中的表达 | 第27页 |
| 3.2 NRP-1与肿瘤的发生发展 | 第27-28页 |
| 3.3 NRP-1表达与肿瘤进展的机制 | 第28页 |
| 三、Neμropilin-1在乳腺癌中的研究进展 | 第28-29页 |
| 四、肿瘤淋巴管转移途径 | 第29-31页 |
| 1 淋巴管的结构特征和功能 | 第29页 |
| 2 淋巴管生成因子及其机制 | 第29-30页 |
| 3 淋巴管生成和淋巴管转移研究进展 | 第30-31页 |
| 五、研究目的及内容 | 第31-32页 |
| 第一章 NRP-1mAb的制备与PLV-NRP-1RNAi的构建及其鉴定 | 第32-56页 |
| 一、材料与方法 | 第32-48页 |
| 1 材料 | 第32-39页 |
| 1.1 细胞株和实验动物 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第32-33页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第33-34页 |
| 1.4 引物序列 | 第34页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第34-39页 |
| 2 抗体制备、纯化以及鉴定方法 | 第39-43页 |
| 2.1 抗体的生产 | 第39页 |
| 2.2 抗体的纯化 | 第39-40页 |
| 2.3 抗体的透析和冻干 | 第40-41页 |
| 2.4 抗体的纯度鉴定 | 第41-42页 |
| 2.5 抗体的浓度测定 | 第42页 |
| 2.6 抗体的滴度鉴定 | 第42页 |
| 2.7 细胞免疫荧光染色 | 第42-43页 |
| 3 质粒构建及鉴定方法 | 第43-48页 |
| 3.1 干扰片段退火连接 | 第43页 |
| 3.2 质粒转化、鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 质粒提取 | 第44-45页 |
| 3.4 脂质体转染 | 第45页 |
| 3.5 细胞mRNA水平表达量 | 第45-47页 |
| 3.6 Western bloting | 第47-48页 |
| 二、结果与分析 | 第48-54页 |
| 1 抗体纯度测定 | 第48-49页 |
| 2 滴度测定 | 第49-50页 |
| 3 细胞免疫荧光分析 | 第50-51页 |
| 4 克隆测序结果 | 第51-52页 |
| 5 转染效率鉴定 | 第52-53页 |
| 6 PCR检测 | 第53页 |
| 7 Western blotting | 第53-54页 |
| 三、讨论 | 第54-56页 |
| 第二章 NRP-1对乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学特性的作用及分子机制 | 第56-72页 |
| 一、材料与方法 | 第56-61页 |
| 1 材料 | 第56-58页 |
| 1.1 细胞株 | 第56页 |
| 1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第57-58页 |
| 2 实验方法 | 第58-61页 |
| 2.1 MTT法 | 第58-59页 |
| 2.2 划痕实验 | 第59页 |
| 2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第59-60页 |
| 2.4 qPCR反应 | 第60-61页 |
| 2.5 Western blot分析NRP-1及相关信号蛋白的表达 | 第61页 |
| 2.6 统计学处理 | 第61页 |
| 二、结果与分析 | 第61-69页 |
| 1 NRP-1对细胞增殖的影响 | 第61-62页 |
| 1.1 普通显微镜法观察细胞形态变化 | 第61-62页 |
| 1.2 MTT法 | 第62页 |
| 2 划痕实验检测细胞迁移 | 第62-63页 |
| 3 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第63-64页 |
| 4 qPCR检测 | 第64-67页 |
| 5 Western blotting | 第67-69页 |
| 三、讨论 | 第69-72页 |
| 第三章 NRP-1对HLECs的增殖、迁移侵袭及其体外小管形成能力的影响 | 第72-85页 |
| 一、材料与方法 | 第72-75页 |
| 1 材料 | 第72-73页 |
| 1.1 细胞株 | 第72页 |
| 1.2 主要试剂 | 第72页 |
| 1.3 主要仪器及耗材 | 第72-73页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第73页 |
| 2 实验方法 | 第73-75页 |
| 2.1 条件培养基的获取 | 第73-74页 |
| 2.2 CCK-8实验 | 第74页 |
| 2.3 Transwell检测HLECs的迁移侵袭作用 | 第74-75页 |
| 2.4 细胞成管实验 | 第75页 |
| 二、结果与分析 | 第75-84页 |
| 1 CCK-8检测HLECs增殖 | 第75-77页 |
| 2 HLECs迁移实验 | 第77-80页 |
| 3 HLECs侵袭实验 | 第80-82页 |
| 4 HLECs体外成管实验 | 第82-84页 |
| 5 统计学处理 | 第84页 |
| 三、讨论 | 第84-85页 |
| 第四章 NRP-1对乳腺癌裸鼠移植瘤生长的影响 | 第85-105页 |
| 一、材料和方法 | 第85-91页 |
| 1 材料 | 第85-87页 |
| 1.1 细胞株及实验动物 | 第85页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第85-86页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第86页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第86-87页 |
| 2 实验方法 | 第87-91页 |
| 2.1 乳腺癌裸鼠模型的构建 | 第87-88页 |
| 2.2 乳腺癌裸鼠模型的分组 | 第88页 |
| 2.3 观察指标 | 第88页 |
| 2.4 免疫组织化学染色 | 第88-90页 |
| 2.5 qPCR检测组织内NRP-1 mRNA水平变化量 | 第90-91页 |
| 2.6 Western blotting | 第91页 |
| 二、结果分析 | 第91-104页 |
| 1 NRP-1mAb与NRP-1RNAi组移植瘤的生长抑制 | 第91-95页 |
| 1.1 各组移植瘤的体重情况 | 第91-92页 |
| 1.2 各组移植瘤体积以及瘤重的比较 | 第92-95页 |
| 2 HE常规染色 | 第95-96页 |
| 3 免疫组织化学染色 | 第96-99页 |
| 4 组织内NRP-1、VEGFR、PI3K、AKT mRNA水平变化量 | 第99-102页 |
| 5 Western blotting | 第102-104页 |
| 三、讨论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-115页 |
| 本文存在的问题和今后开展的研究 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 研究生在学期间发论文表学术论文目录 | 第117页 |
