| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-32页 |
| 1.1 乳腺癌及乳腺癌转移 | 第15-19页 |
| 1.1.1 乳腺癌简介 | 第15-16页 |
| 1.1.2 乳腺癌转移的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2 上皮间充质转化(EMT) | 第19-24页 |
| 1.2.1 EMT简介 | 第19-20页 |
| 1.2.2 EMT与E-cadherin | 第20页 |
| 1.2.3 EMT转录因子 | 第20-23页 |
| 1.2.4 EMT与TGFβ信号通路 | 第23-24页 |
| 1.3 HnRNPA2/B1的功能与研究进展 | 第24-28页 |
| 1.3.1 HnRNPA2/B1的结构 | 第24-25页 |
| 1.3.2 HnRNPA2B1与肿瘤的关系 | 第25-27页 |
| 1.3.3 HnRNPA2/B1参与转录和可变剪接 | 第27-28页 |
| 1.4 前纤维蛋白(Profilin)研究进展 | 第28-29页 |
| 1.5 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第29-30页 |
| 1.6 本论文的具体研究工作及其科学意义 | 第30-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-66页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-41页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第32页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第32页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第32-33页 |
| 2.1.4 试剂与药品 | 第33-36页 |
| 2.1.5 主要仪器耗材 | 第36-38页 |
| 2.1.6 实验室自备试剂 | 第38-41页 |
| 2.2 试验方法 | 第41-66页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第41-42页 |
| 2.2.2 分子克隆 | 第42-48页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第48-49页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第49页 |
| 2.2.5 构建稳定敲除HnRNP A2/B1细胞株 | 第49-51页 |
| 2.2.6 蛋白提取与Western-blot | 第51-54页 |
| 2.2.7 实时定量PCR | 第54-56页 |
| 2.2.8 免疫荧光 | 第56-57页 |
| 2.2.9 流式细胞术检测F-actin | 第57页 |
| 2.2.10 Transwell实验 | 第57-58页 |
| 2.2.11 MTT增殖实验 | 第58页 |
| 2.2.12 RNA免疫沉淀 | 第58-60页 |
| 2.2.13 动物实验 | 第60-61页 |
| 2.2.14 石蜡包埋与HE染色 | 第61-63页 |
| 2.2.15 免疫组化 | 第63-64页 |
| 2.2.16 质谱样品准备(SILAC) | 第64-65页 |
| 2.2.17 统计学分析 | 第65-66页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第66-95页 |
| 3.1 稳定敲除HnRNPA2/B1乳腺癌细胞株的构建 | 第66-69页 |
| 3.1.1 CRISPR/Cas9构建稳定敲除HnRNPA2/B1的MDA-MB-231细胞系 | 第66-68页 |
| 3.1.2 HnRNPA2/B1在稳定敲除的单克隆细胞中的敲除机制 | 第68-69页 |
| 3.2 HnRNP A2/B1对乳腺癌细胞形态的影响 | 第69-74页 |
| 3.2.1 敲除HnRNP A2/B1改变乳腺癌细胞MDA-MB-231的形态 | 第69-70页 |
| 3.2.2 HnRNP A2/B1调节MDA-MB-231细胞骨架F-actin聚合 | 第70-74页 |
| 3.3 HnRNP A2/B1在体外抑制乳腺癌细胞迁移 | 第74-77页 |
| 3.3.1 敲除HnRNP A2/B1促进乳腺癌MDA-MB-23 1细胞迁移 | 第74-75页 |
| 3.3.2 发生迁移的乳腺癌MDA-MB-231细胞HnRNP A2/B1表达低 | 第75-76页 |
| 3.3.3 HnRNP A2/B1在不同乳腺癌细胞株的表达差异 | 第76-77页 |
| 3.4 HnRNP A2/B1在体内抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移 | 第77-81页 |
| 3.4.1 敲除HnRNP A2/B1促进MDA-MB-231细胞实验性肺转移 | 第77-79页 |
| 3.4.2 敲除HnRNP A2/B1促进MDA-MB-231细胞自发性肺转移 | 第79-81页 |
| 3.5 敲除HnRNPA2/B1抑制MDA-MB-231细胞的增殖和成瘤能力 | 第81-84页 |
| 3.6 HnRNP A2/B1在人乳腺癌临床样本中的表达 | 第84-86页 |
| 3.7 敲除HnRNP A2/B1的差异蛋白生物信息学分析 | 第86-89页 |
| 3.8 HnRNP A2/B1促进了MDA-MB-231 EMT的发生 | 第89-90页 |
| 3.9 HnRNPA2/B1调控Profilin抑制乳腺癌细胞迁移 | 第90-95页 |
| 3.9.1 HnRNP A2/B1影响Pfn1和Pfn2的mRNA、蛋白水平 | 第90-92页 |
| 3.9.2 HnRNP A2/B1分别与Pfn1、Pfn2 mRNA相互作用 | 第92-95页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第95-108页 |
| 4.1 HnRNP A2/B1在乳腺癌细胞中的稳定敲除 | 第95页 |
| 4.2 HnRNP A2/B1影响乳腺癌细胞形态 | 第95-97页 |
| 4.3 HnRNP A2/B1抑制乳腺癌转移 | 第97-102页 |
| 4.3.1 HnRNP A2/B1在体外抑制乳腺癌细胞的侵袭与迁移 | 第97-100页 |
| 4.3.2 HnRNP A2/B1在体内抑制乳腺癌细胞的转移 | 第100-101页 |
| 4.3.3 HnRNP A2/B1与临床乳腺癌的关系 | 第101-102页 |
| 4.4 HnRNPA2/B1抑制乳腺癌EMT的分子机制研究 | 第102-107页 |
| 4.5 本研究不足与展望 | 第107-108页 |
| 第五章 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 附录 | 第131页 |
