| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 穿山龙薯蓣皂苷 | 第9-12页 |
| 1.1.1 穿山龙薯蓣皂苷简介 | 第9页 |
| 1.1.2 穿山龙薯蓣的化学成分及其结构 | 第9-11页 |
| 1.1.3 穿山龙薯蓣皂苷的药理作用 | 第11-12页 |
| 1.2 薯蓣皂苷糖苷酶 | 第12-13页 |
| 1.2.1 甾体皂苷糖苷酶简介 | 第12页 |
| 1.2.2 薯蓣皂苷糖苷酶研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 酶蛋白的分离纯化 | 第13-14页 |
| 1.4 酶蛋白的翻译后修饰 | 第14-18页 |
| 1.4.1 蛋白质翻译后修饰及其作用 | 第14页 |
| 1.4.2 蛋白质糖基化及其作用 | 第14-15页 |
| 1.4.3 蛋白质糖基化修饰研究方法 | 第15-18页 |
| 1.4.3.1 鉴定糖基化蛋白质方法 | 第15-17页 |
| 1.4.3.2 糖基化蛋白质糖基化表征方法 | 第17-18页 |
| 1.5 蛋白质糖基化研究现状 | 第18-19页 |
| 1.6 本论文主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-30页 |
| 2.1 试验原料 | 第21页 |
| 2.1.1 菌种 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂与材料 | 第21页 |
| 2.1.3 主要设备 | 第21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 菌种的液体发酵 | 第21-22页 |
| 2.2.1.1 液体培养基的配制 | 第21-22页 |
| 2.2.1.2 菌体的培养 | 第22页 |
| 2.2.2 粗酶液的提取及酶活力检测 | 第22-23页 |
| 2.2.2.1 缓冲液的配制 | 第22页 |
| 2.2.2.2 酶液的提取 | 第22页 |
| 2.2.2.3 酶活力的检测 | 第22-23页 |
| 2.2.2.4 薄层层析法(TLC) | 第23页 |
| 2.2.3 薯蓣皂苷糖苷酶的分离纯化 | 第23-26页 |
| 2.2.3.1 Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱对粗酶液的分离 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 DEAE-cellulose DE52离子交换柱对薯蓣皂苷糖苷酶进行纯化 | 第24-26页 |
| 2.2.3.3 薯蓣皂苷糖苷酶纯度检测及分子量测定 | 第26页 |
| 2.2.4 薯蓣皂苷糖苷酶酶性质及酶反应特性的研究 | 第26-28页 |
| 2.2.4.1 酶反应的最适pH | 第26页 |
| 2.2.4.2 酶的pH稳定性 | 第26-27页 |
| 2.2.4.3 酶反应的最适温度 | 第27页 |
| 2.2.4.4 酶的温度稳定性 | 第27页 |
| 2.2.4.5 金属离子对酶反应的影响 | 第27页 |
| 2.2.4.6 米氏常数的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.5 三氟甲基磺酸(TFMS)法初步鉴定薯蓣皂苷糖苷酶糖基化 | 第28-29页 |
| 2.2.5.1 薯蓣皂苷糖苷酶纯酶的后处理 | 第28页 |
| 2.2.5.2 三氟甲基磺酸(TFMS)法去糖基化 | 第28-29页 |
| 2.2.5.3 SDS-PAGE初步鉴定糖基化 | 第29页 |
| 2.2.6 肽N-糖苷酶F(PNGase F)法鉴定薯蓣皂苷糖苷酶糖基化形式 | 第29页 |
| 2.2.7 生物质谱分析薯蓣皂苷糖苷酶糖基化位点 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-50页 |
| 3.1 粗酶液的提取及酶活力测定 | 第30-31页 |
| 3.2 薯蓣皂苷糖苷酶的分离纯化 | 第31-38页 |
| 3.2.1 Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱对粗酶液的分离 | 第31-32页 |
| 3.2.2 DEAE-cellulose DE52离子交换柱对薯蓣皂苷糖苷酶进行纯化 | 第32-36页 |
| 3.2.2.1 第一次离子交换层析分离纯化目的蛋白 | 第32-34页 |
| 3.2.2.2 第二次离子交换层析分离纯化目的蛋白 | 第34-36页 |
| 3.2.3 薯蓣皂苷糖苷酶纯度检测及分子量测定 | 第36-38页 |
| 3.2.3.1 SDS-PAGE对薯蓣皂苷糖苷酶的纯度检测及分子量测定 | 第36-37页 |
| 3.2.3.2 HPLC对薯蓣皂苷糖苷酶的纯度检测 | 第37-38页 |
| 3.3 薯蓣皂苷糖苷酶性质的研究 | 第38-43页 |
| 3.3.1 酶反应的最适pH值 | 第38-39页 |
| 3.3.2 酶的pH稳定性 | 第39-40页 |
| 3.3.3 酶反应的最适温度 | 第40页 |
| 3.3.4 酶的温度稳定性 | 第40-41页 |
| 3.3.5 金属离子对薯蓣皂苷糖苷酶的影响 | 第41页 |
| 3.3.6 薯蓣皂苷糖苷酶的米氏常数 | 第41-43页 |
| 3.4 TFMS法对薯蓣皂苷糖苷酶糖基化的初步鉴定 | 第43页 |
| 3.5 PNGase F法鉴定薯蓣皂苷糖苷酶糖基化形式 | 第43-44页 |
| 3.6 生物质谱分析薯蓣皂苷糖苷酶糖基化位点 | 第44-50页 |
| 3.6.1 Q-TOF2分析薯蓣皂苷糖苷酶肽谱全图 | 第44-46页 |
| 3.6.2 ESI MS/MS鉴定薯蓣皂苷糖苷酶糖基化位点 | 第46-50页 |
| 第四章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
