| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 美国白蛾简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 美国白蛾的分类地位和形态特征 | 第12页 |
| 1.1.2 美国白蛾的发生规律和危害 | 第12-13页 |
| 1.1.3 美国白蛾的防治方法 | 第13-15页 |
| 1.2 几丁质脱乙酰酶研究背景及进展 | 第15-20页 |
| 1.2.1 几丁质概述 | 第15页 |
| 1.2.2 几丁质代谢 | 第15-18页 |
| 1.2.3 昆虫几丁质脱乙酰酶研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 实验技术简介 | 第20-22页 |
| 1.3.1 实时荧光定量PCR技术 | 第20页 |
| 1.3.2 RNA干扰技术 | 第20-22页 |
| 1.3.3 免疫荧光技术 | 第22页 |
| 1.4 研究内容及目的意义 | 第22-24页 |
| 2 美国白蛾hccdas基因的克隆与原核表达 | 第24-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 培养基 | 第24页 |
| 2.1.4 试剂及溶液 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 美国白蛾幼虫组织样本制备 | 第26页 |
| 2.2.2 美国白蛾幼虫总RNA提取及cDNA合成 | 第26-27页 |
| 2.2.3 hcactin基因的克隆与原核表达 | 第27-29页 |
| 2.2.4 hccdas基因的克隆 | 第29-31页 |
| 2.2.5 hccdas基因的序列分析 | 第31页 |
| 2.2.6 hccdas基因的原核表达及多克隆抗体制备 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-40页 |
| 2.3.1 hcactin基因的克隆与原核表达 | 第32-35页 |
| 2.3.2 hccdas基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.3.3 hccda1、hccda2和hccda4基因的生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 2.3.4 hccdas基因原核重组表达载体的构建 | 第39页 |
| 2.3.5 HcCDAs重组蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 2.5 小结 | 第41-43页 |
| 3 美国白蛾hccdas在昆虫细胞中的表达及HcCDAs酶学特性 | 第43-52页 |
| 3.1 试验材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 供试昆虫与昆虫细胞系 | 第43页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第43页 |
| 3.1.3 主要培养基及试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第44页 |
| 3.2 试验方法 | 第44-46页 |
| 3.2.1 重组质粒pFastBac-hccdas的构建及鉴定 | 第44页 |
| 3.2.2 重组Bacmid-hccdas的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.3 HcCDAs重组蛋白在昆虫细胞中的表达 | 第45页 |
| 3.2.4 HcCDAs重组蛋白的几丁质结合活性 | 第45页 |
| 3.2.5 HcCDAs重组蛋白的催化活性 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.3.1 重组质粒pFastBac-hccdas的构建及鉴定 | 第46页 |
| 3.3.2 重组Bacmid-hccdas的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 HcCDAs重组蛋白在昆虫细胞中的表达 | 第47页 |
| 3.3.4 HcCDAs重组蛋白的几丁质结合活性 | 第47-48页 |
| 3.3.5 HcCDAs重组蛋白的催化活性 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-52页 |
| 4 hccdas基因在美国白蛾体内的转录和表达分析 | 第52-60页 |
| 4.1 试验材料 | 第52页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第52页 |
| 4.1.2 主要溶液及试剂 | 第52页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第52页 |
| 4.2 试验方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 美国白蛾幼虫及组织样本制备 | 第52页 |
| 4.2.2 总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第52-53页 |
| 4.2.3 美国白蛾幼虫及组织蛋白提取 | 第53页 |
| 4.2.4 hccdas基因在美国白蛾体内的转录 | 第53-54页 |
| 4.2.5 HcCDAs蛋白在美国白蛾体内的表达 | 第54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-58页 |
| 4.3.1 hccdas基因在美国白蛾不同发育阶段的转录 | 第54-55页 |
| 4.3.2 hccdas基因在美国白蛾幼虫不同组织中的转录 | 第55-56页 |
| 4.3.3 hccda2a和hccda2b基因的转录差异 | 第56-57页 |
| 4.3.4 HcCDAs蛋白在美国白蛾不同发育阶段的表达 | 第57页 |
| 4.3.5 HcCDAs蛋白在美国白蛾幼虫不同组织中的表达 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 5 Cry1Ab35和HcNPV对hccdas基因的表达调控 | 第60-65页 |
| 5.1 试验材料 | 第60页 |
| 5.1.1 供试昆虫 | 第60页 |
| 5.1.2 菌株 | 第60页 |
| 5.1.3 昆虫病毒 | 第60页 |
| 5.1.4 主要溶液及试剂 | 第60页 |
| 5.1.5 主要仪器设备 | 第60页 |
| 5.2 试验方法 | 第60-61页 |
| 5.2.1 Bt工程菌HD1Ab35晶体蛋白提取及浓度测定 | 第60-61页 |
| 5.2.2 美国白蛾幼虫样本制备 | 第61页 |
| 5.2.3 总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第61页 |
| 5.2.4 Cry1Ab35蛋白对美国白蛾hccdas基因的表达调控 | 第61页 |
| 5.2.5 HcNPV对美国白蛾hccdas基因的表达调控 | 第61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-63页 |
| 5.3.1 Cry1Ab35蛋白对美国白蛾hccdas基因的表达调控 | 第61-62页 |
| 5.3.2 HcNPV对美国白蛾hccdas基因的表达调控 | 第62-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63-64页 |
| 5.5 小结 | 第64-65页 |
| 6 美国白蛾HcCDAs的功能分析 | 第65-75页 |
| 6.1 试验材料 | 第65页 |
| 6.1.1 供试昆虫 | 第65页 |
| 6.1.2 主要溶液及试剂 | 第65页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第65页 |
| 6.2 试验方法 | 第65-68页 |
| 6.2.1 dsRNA合成引物设计 | 第65-66页 |
| 6.2.2 合成dsRNA模板制备 | 第66页 |
| 6.2.3 体外转录合成dsRNA | 第66-67页 |
| 6.2.4 hccdas基因的RNA干扰 | 第67页 |
| 6.2.5 qRT-PCR分析RNAi效果 | 第67页 |
| 6.2.6 Westernblot分析RNAi效果 | 第67页 |
| 6.2.7 免疫组织化学构成 | 第67-68页 |
| 6.2.8 几丁质含量测定 | 第68页 |
| 6.3 结果与分析 | 第68-73页 |
| 6.3.1 dsRNA的合成及检测 | 第68-69页 |
| 6.3.2 dsRNA-hccdas注射美国白蛾幼虫后表型分析 | 第69页 |
| 6.3.3 RNAi效果分析 | 第69-72页 |
| 6.3.4 几丁质含量测定 | 第72-73页 |
| 6.4 讨论 | 第73-74页 |
| 6.5 小结 | 第74-75页 |
| 全文讨论 | 第75-76页 |
| 全文结论 | 第76-77页 |
| 本研究创新点 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-98页 |
| 在读期间已发表论文 | 第98-99页 |
| 作者简历 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
