| 致谢 | 第6-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1.1 PRRSV概述 | 第15-22页 |
| 1.1.1 PRRSV的病毒学特征 | 第15-16页 |
| 1.1.2 PRRSV基因组成 | 第16-17页 |
| 1.1.3 PRRSV蛋白组成 | 第17-22页 |
| 1.1.3.1 PRRSV结构蛋白 | 第17-20页 |
| 1.1.3.2 PRRSV非结构蛋白(NonstructuralProtein,NSP) | 第20-22页 |
| 1.2 PRRSV入侵受体 | 第22-26页 |
| 1.2.1CD163 | 第22-24页 |
| 1.2.1.1 CD163的结构和功能 | 第22-23页 |
| 1.2.1.2 CD163在PRRS病毒入侵过程中的作用 | 第23页 |
| 1.2.1.3 CD163参与PRRSV入侵的结构域 | 第23-24页 |
| 1.2.2 Sn | 第24-26页 |
| 1.2.2.1 Sn结构和功能 | 第24-25页 |
| 1.2.2.2 Sn在PRRSV入侵过程中的作用 | 第25页 |
| 1.2.2.3 HS | 第25页 |
| 1.2.2.4CD151 | 第25-26页 |
| 1.2.2.5 vimentin和DC-SIGN | 第26页 |
| 1.3 PRRSV的感染过程 | 第26-27页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第2章 CD163介导PRRSV感染宿主细胞关键结构域SRCR5结构解析及重要氨基酸位点鉴定.. | 第29-71页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料和方法 | 第29-53页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第29-37页 |
| 2.2.1.1 质粒和菌株 | 第29页 |
| 2.2.1.2 病毒和细胞 | 第29-30页 |
| 2.2.1.3 主要工具酶 | 第30页 |
| 2.2.1.4 试剂盒 | 第30页 |
| 2.2.1.5 合成引物和测序 | 第30-31页 |
| 2.2.1.6 主要试剂和耗材 | 第31-32页 |
| 2.2.1.7 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2.2.1.8 常用培养液和缓冲液 | 第32-37页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第37-53页 |
| 2.2.2.1 pCD163SRCR5结构域重组蛋白在黑腹果蝇S2细胞中的克隆、表达与纯化 | 第37-43页 |
| 2.2.2.2 pCD163SRCR5结构域重组蛋白的晶体生长 | 第43-45页 |
| 2.2.2.3 pCD163SRCR5结构域重组蛋白晶体数据收集与处理 | 第45页 |
| 2.2.2.4 pCD163SRCR5结构域重组蛋白晶体结构解析 | 第45-46页 |
| 2.2.2.5 pCD163SRCR5结构域介导PRRSV感染重要氨基酸位点鉴定 | 第46-48页 |
| 2.2.2.6 pCD163SRCR5结构域重组蛋白在巴斯德毕氏酵母X-33中的克隆、表达、纯化、结晶及结构解析 | 第48-52页 |
| 2.2.2.7 巴斯德毕氏酵母中表达pCD163SRCR5结构域重组蛋白晶体数据收集及结构解析 | 第52页 |
| 2.2.2.8 pCD163SRCR5结构域重组蛋白对PRRSV感染的影响 | 第52-53页 |
| 2.3 结果和分析 | 第53-69页 |
| 2.3.1 果蝇胚胎S2细胞系统重组表达pCD163SRCR5结构域重组蛋白的结果 | 第53-62页 |
| 2.3.1.1 pMT/Bip/V5-HisA-pCD163SRCR5重组载体的构建 | 第53页 |
| 2.3.1.2 pMT/Bip/V5-HisA-pCD163SRCR5结构域重组蛋白的表达与纯化 | 第53-55页 |
| 2.3.1.3 pMT/Bip/V5-HisA-pCD163SRCR5结构域重组蛋白结晶及优化 | 第55-56页 |
| 2.3.1.4 pMT/Bip/V5-HisA-pCD163SRCR5结构域重组蛋白晶体数据收集及结构处理 | 第56-58页 |
| 2.3.1.5 pCD163SRCR5结构域在PRRSV入侵过程中重要氨基酸位点鉴定 | 第58-62页 |
| 2.3.2 毕氏酵母X-33系统表达pCD163SRCR5结构域重组蛋白的结果 | 第62-68页 |
| 2.3.2.1 pPICZαA-pCD163SRCR5结构域重组载体的构建 | 第62-63页 |
| 2.3.2.2 pPICZαA-pCD163SRCR5结构域重组蛋白的表达与纯化 | 第63-64页 |
| 2.3.2.3 pPICZαA-pCD163SRCR5结构域重组蛋白结晶及条件优化 | 第64-65页 |
| 2.3.2.4 pPICZαA-pCD163SRCR5结构域重组蛋白的晶体数据收集、处理及结构解析 | 第65-67页 |
| 2.3.2.5 巴斯德毕氏酵母表达的pCD163SRCR5结构域重组蛋白的功能 | 第67页 |
| 2.3.2.6 巴斯德毕氏酵母表达pCD163SRCR5结构域重组蛋白晶体结构 | 第67-68页 |
| 2.3.3 不同表达系统表达的pCD163SRCR5结构域重组蛋白晶体结构对比 | 第68-69页 |
| 2.4 讨论与结论 | 第69-71页 |
| 第3章 不同种属CD163SRCR5结构域结构解析及功能研究 | 第71-79页 |
| 3.1 引言 | 第71页 |
| 3.2 材料和方法 | 第71页 |
| 3.3.1 引物设计与合成 | 第71页 |
| 3.3 结果和分析 | 第71-77页 |
| 3.3.1 不同种属CD163SRCR5结构域构建 | 第71-72页 |
| 3.3.2 不同种属CD163SRCR5结构域重组蛋白表达与纯化 | 第72-73页 |
| 3.3.3 不同种属CD163SRCR5结构域重组蛋白结晶及条件优化 | 第73-77页 |
| 3.3.4 不同种属CD163SRCR5结构域蛋白晶体数据收集 | 第77页 |
| 3.3.5 不同种属CD163SRCR5结构域蛋白晶体结构处理及功能研究 | 第77页 |
| 3.4 讨论与结论 | 第77-79页 |
| 第4章 CD163介导PRRSV感染宿主细胞功能结构域 | 第79-87页 |
| 4.1 引言 | 第79页 |
| 4.2 材料和方法 | 第79页 |
| 4.2.1 设计与合成引物 | 第79页 |
| 4.3 结果和分析 | 第79-85页 |
| 4.3.1 pCD163SRCR5-9结构域重组蛋白在黑腹果蝇胚胎S2细胞中的克隆、表达、纯化及结晶 | 第79-85页 |
| 4.3.1.1 pMT/Bip/V5-HisA-pCD163SRCR5-9结构域重组质粒的构建 | 第79-80页 |
| 4.3.1.2 pMT/Bip/V5-HisA-pCD163SRCR5-9结构域重组蛋白表达与纯化 | 第80-83页 |
| 4.3.1.3 S2细胞表达pCD163SRCR5-9结构域重组蛋白结晶及条件优化 | 第83-85页 |
| 4.3.2 S2细胞表达的pCD163SRCR5-9结构域重组蛋白的晶体数据收集 | 第85页 |
| 4.3.3 S2细胞表达的pCD163SRCR5-9结构域重组蛋白的晶体数据处理及结构解析 | 第85页 |
| 4.3.4 pCD163SRCR5-9结构域介导PRRSV感染重要功能域和氨基酸位点鉴定 | 第85页 |
| 4.4 讨论与结论 | 第85-87页 |
| 第5章 猪源CD163SRCR5结构域单克隆抗体制备 | 第87-92页 |
| 5.1 引言 | 第87页 |
| 5.2 材料和方法 | 第87-90页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第87-88页 |
| 5.2.1.1 试剂和耗材 | 第87-88页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第88-90页 |
| 5.2.2.1 S2细胞表达pCD163SRCR5结构域重组蛋白的小鼠免疫 | 第88页 |
| 5.2.2.2 细胞融合 | 第88-89页 |
| 5.2.2.3 间接ELISA(Indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay) | 第89-90页 |
| 5.2.2.4 间接免疫荧光(Indirectimmunofluorescence,IFA) | 第90页 |
| 5.3 结果和分析 | 第90页 |
| 5.3.1 小鼠血清抗体效价测定 | 第90页 |
| 5.3.2 单抗筛选与特性鉴定 | 第90页 |
| 5.3.2.1 pCD163SRCR5结构域重组蛋白单抗的IFA筛选 | 第90页 |
| 5.4 讨论与结论 | 第90-92页 |
| 研究总结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 附录 | 第105-108页 |
| 附录A 缩略词表 | 第105-108页 |
| 附录B | 第108页 |
