| 致谢 | 第5-11页 |
| 摘要 | 第11-16页 |
| 英文缩写及名称 | 第16-17页 |
| 文献综述 | 第17-29页 |
| 1 病原 | 第17-22页 |
| 1.1 分类来源 | 第18页 |
| 1.2 形态结构与繁殖 | 第18-19页 |
| 1.3 基因组特点与系统发育 | 第19-20页 |
| 1.4 流行情况 | 第20-22页 |
| 2 检测方法研究进展 | 第22-25页 |
| 2.1 临床表现 | 第22-23页 |
| 2.2 病原学诊断 | 第23页 |
| 2.3 血清学诊断 | 第23页 |
| 2.4 分子生物学诊断 | 第23-25页 |
| 3 体外培养 | 第25页 |
| 4 致病机制研究 | 第25-28页 |
| 4.1 AP感染宿主 | 第25-26页 |
| 4.2 病原体与宿主之间的相互作用 | 第26-27页 |
| 4.3 持续感染 | 第27-28页 |
| 小结 | 第28-29页 |
| 第一部分 无浆体和泰勒虫双重PCR检测方法的建立及AP系统发育分析 | 第29-54页 |
| 引言 | 第29页 |
| 1 材料与方法 | 第29-37页 |
| 1.1 样品来源 | 第29-30页 |
| 1.1.1 阳性对照样品 | 第29页 |
| 1.1.2 临床样品 | 第29-30页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 1.4 血液涂片姬姆萨染色 | 第30-31页 |
| 1.5 基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 1.5.1 血液样品基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 1.5.2 蜱虫基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 1.6 双重PCR的引物设计与合成 | 第32页 |
| 1.7 扩增体系及条件的优化 | 第32-33页 |
| 1.8 特异性试验、敏感性试验、重复性试验 | 第33页 |
| 1.9 PCR产物克隆、测序及序列分析 | 第33-35页 |
| 1.9.1 PCR产物的纯化 | 第33-34页 |
| 1.9.2 目的产物的连接与转化 | 第34页 |
| 1.9.3 重组菌的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| 1.10 临床样品的检测 | 第35-36页 |
| 1.11 羊血液样品PCR的扩增 | 第36页 |
| 1.12 犬血液样品的PCR扩增 | 第36页 |
| 1.13 牛血液样品的扩增 | 第36-37页 |
| 1.14 PCR产物的鉴定 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-50页 |
| 2.1 双重PCR方法的建立 | 第37-39页 |
| 2.1.1 双重PCR扩增体系与条件优化结果 | 第37-39页 |
| 2.2 特异性、敏感性和重复性试验结果 | 第39-41页 |
| 2.2.1 特异性结果 | 第39-40页 |
| 2.2.2 敏感性结果 | 第40-41页 |
| 2.2.3 重复性结果 | 第41页 |
| 2.4 PCR产物的克隆测序结果 | 第41-42页 |
| 2.5 临床样品检测结果 | 第42-43页 |
| 2.6 羊血液样品无浆体和泰勒虫的感染情况 | 第43-44页 |
| 2.7 犬血液样品无浆体的感染情况 | 第44页 |
| 2.8 牛血液样品无浆体和泰勒虫感染情况 | 第44-46页 |
| 2.9 采集于牛体表蜱虫检查结果 | 第46-47页 |
| 2.9.1 蜱虫PCR检查 | 第46页 |
| 2.9.2 测序及结果分析 | 第46页 |
| 2.9.3 基于16SrRNA对蜱虫进化分析 | 第46-47页 |
| 2.10 基于msp4基因对蜱源与牛源A.marginale种系发育分析 | 第47-48页 |
| 2.10.1 测序及结果分析 | 第47页 |
| 2.10.2 A.marginale种系发育分析 | 第47-48页 |
| 2.11 基于16SrRNA基因对犬源,羊源和人源的AP种系发育分析 | 第48-50页 |
| 2.11.1 测序及结果分析 | 第48页 |
| 2.11.2 AP种系发育分析 | 第48-50页 |
| 3 结论与讨论 | 第50-54页 |
| 3.1 成功建立了从属的水平鉴别无浆体和泰勒虫的双重PCR方法 | 第50-51页 |
| 3.2 基于AP16SrRNA基因种系进化分析表明本研究得到的AP犬源分离株可能存在人兽共患风险 | 第51-52页 |
| 3.3 犬源AP存在遗传变异和地理隔离 | 第52页 |
| 3.4 微小扇头蜱传播边缘无浆体致牛患边缘无浆体病 | 第52-54页 |
| 第二部分 AP定量PCR方法的建立及其在HL60细胞内培养及其增值规律监测 | 第54-74页 |
| 引言 | 第54页 |
| 1 材料与方法 | 第54-61页 |
| 1.1 所用的样品与HL60细胞来源 | 第54页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第54-55页 |
| 1.3 主要仪器 | 第55页 |
| 1.4 方法 | 第55-58页 |
| 1.4.1 模板DNA的提取 | 第55页 |
| 1.4.2 引物的设计与合成 | 第55页 |
| 1.4.3 重组质粒标准品的制备 | 第55-57页 |
| 1.4.4 反应条件的优化与标准曲线的绘制 | 第57-58页 |
| 1.4.5 特异性试验、敏感性试验、重复性试验 | 第58页 |
| 1.4.6 临床样品检测 | 第58页 |
| 1.5 通过接种人早幼粒细胞(HL60细胞)培养AP | 第58-61页 |
| 1.5.1 HL60细胞的复苏与培养 | 第58页 |
| 1.5.2 羊血液样品的AP感染情况检查 | 第58页 |
| 1.5.3 AP接种HL60细胞步骤 | 第58-59页 |
| 1.5.4 细胞DNA的提取 | 第59页 |
| 1.5.5 细胞姬姆萨染色检查AP感染 | 第59-60页 |
| 1.5.6 巢式PCR检查AP感染 | 第60页 |
| 1.5.7 定量PCR检查AP感染 | 第60页 |
| 1.5.8 间接免疫荧光(IFA)检查细胞AP感染 | 第60页 |
| 1.5.9 细胞感染AP测序 | 第60-61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-70页 |
| 2.1 阳性标准品的制备 | 第61页 |
| 2.2 标准曲线的建立及反应条件的优化 | 第61-62页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR的特异性试验结果 | 第62-63页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR敏感性试验结果 | 第63-64页 |
| 2.5 临床样品检测结果 | 第64页 |
| 2.6 AP接种HL60细胞的动态变化 | 第64-69页 |
| 2.7 基16SrRNA基因对细胞分离株AP种系发育分析 | 第69-70页 |
| 2.7.1 测序及结果分析 | 第69页 |
| 2.7.2 AP种系发育分析 | 第69-70页 |
| 3 结论与讨论 | 第70-74页 |
| 3.1 建立了AP实时荧光定量PCR方法并用于检测AP浓度 | 第70-71页 |
| 3.2 体外成功培养AP | 第71-72页 |
| 3.3 AP在HL60细胞内的增殖规律 | 第72-73页 |
| 3.4 AP的持续感染 | 第73页 |
| 3.5 通过HL60培养的获得羊源AP存在人兽共患风险 | 第73-74页 |
| 全文结论 | 第74页 |
| 创新点 | 第74-75页 |
| 附件1 | 第75页 |
| 附表2 本文提交序列的GenBank序列号 | 第75页 |
| 附表3 主要试剂耗材 | 第75页 |
| 附表4 LB液体培养基和固体培养基的配置 | 第75-76页 |
| ABSTRACT | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第80-93页 |
| 博士期间发表论文目录 | 第93页 |
