| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-14页 |
| 1.1 PPR蛋白与人类疾病 | 第10页 |
| 1.2 PPR蛋白的结构特点及功能 | 第10-11页 |
| 1.3 生物体内PPR蛋白的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.4 模式生物——酒裂殖酵母 | 第12页 |
| 1.5 展望 | 第12-14页 |
| 第二章 ppr11为必需基因 | 第14-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-18页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第14-16页 |
| 2.1.2 培养基与相关试剂 | 第16-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第18-19页 |
| 2.2.2 敲除ppr11重组质粒的构建 | 第19-24页 |
| 2.2.3 重组质粒酶切之后LiAc转化yHL6381单倍体酵母菌株 | 第24-25页 |
| 2.2.4 重组质粒酶切之后LiAc转化yHL6403双倍体酵母菌株 | 第25-26页 |
| 2.2.5 随机孢子分析 | 第26页 |
| 2.2.6 pREP82X-ppr11回补ppr11-del-his双倍体酵母菌株 | 第26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-42页 |
| 2.3.1 ppr11-del-his单倍体酵母菌株的筛选 | 第26-27页 |
| 2.3.2 ppr11-del-leu单倍体酵母菌株的筛选 | 第27-28页 |
| 2.3.3 ppr11-del-leu-1000单倍体酵母菌株的筛选 | 第28-29页 |
| 2.3.4 Kim DU构建的ppr11基因缺失突变株的PCR验证 | 第29页 |
| 2.3.5 ppr11-del-leu-1000双倍体酵母菌株的筛选 | 第29-32页 |
| 2.3.6 ppr11-del-his双倍体酵母菌株的筛选 | 第32-35页 |
| 2.3.7 质粒回补ppr11-del-his双倍体酵母菌株 | 第35-42页 |
| 2.4 实验讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 粟酒裂殖酵母ppr10以及ppr11基因相关功能的研究 | 第43-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第43-45页 |
| 3.1.2 培养基与相关试剂试剂 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第45页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第45-49页 |
| 3.2.3 ppr11-del-kanMX6菌株的筛选 | 第49-50页 |
| 3.2.4 ppr11和ppr10基因缺失突变体点圈实验 | 第50页 |
| 3.2.5 高表达ppr11、 ppr10对yHL6381菌株生长的影响 | 第50页 |
| 3.2.6 自身回补ppr11和ppr10的基因缺失突变体 | 第50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-57页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建 | 第50-53页 |
| 3.3.2 ppr11基因敲除菌株的筛选 | 第53-54页 |
| 3.3.3 ppr11和ppr10基因缺失突变体点圈实验 | 第54-56页 |
| 3.3.4 高表达ppr11、ppr10对yHL6381菌株生长的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.5 自身回补ppr11和ppr10的基因缺失突变体 | 第57页 |
| 3.4 实验讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 粟酒裂殖酵母Ppr10和Ppr11的相互作用 | 第59-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-63页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第59-63页 |
| 4.1.2 培养基以及相关试剂 | 第63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-67页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第63-64页 |
| 4.2.2 重组质粒的构建 | 第64-67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-75页 |
| 4.3.1 Ppr10-TAP在yHL6381菌株中的表达及检测 | 第67-69页 |
| 4.3.2 Ppr11-3HA在yHL6381菌株中的表达及检测 | 第69-70页 |
| 4.3.3 Ppr10-HIS、Ppr11-HIS重组质粒的构建以及蛋白原核表达检测 | 第70-71页 |
| 4.3.4 以pET41a为表达载体,构建Ppr10-GST、Ppr10-3-GST、Ppr10-5-GST重组质粒 | 第71-72页 |
| 4.3.5 以pGEX-4T-1为表达载体,原核表达pr10-GST、pr10-3-GST、Ppr10-5-GST重组蛋白 | 第72-73页 |
| 4.3.6 Ppr11-C-HIS蛋白的纯化 | 第73-74页 |
| 4.3.7 Ppr10-GST和Ppr11-C-HIS的体外相互作用 | 第74-75页 |
| 4.4 实验讨论 | 第75-76页 |
| 第五章 全文总结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录一 主要仪器 | 第84-85页 |
| 附录二 本实验所用的质粒 | 第85-87页 |
| 附录三 本实验所用的菌种 | 第87-88页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
