| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 钙离子信号通路主要组分及功能 | 第11-17页 |
| 1.1.1 钙调磷酸酶Calcineurin | 第12-13页 |
| 1.1.2 转录因子CrzA、NFAT | 第13-15页 |
| 1.1.3 质膜上钙离子通道 | 第15-17页 |
| 1.1.3.1 高亲和性钙离子系统(HACS) | 第15-16页 |
| 1.1.3.2 低亲和性钙离子系统(LACS) | 第16-17页 |
| 1.2 盐逆境 | 第17-18页 |
| 1.3 细胞壁完整性信号通路 | 第18-19页 |
| 1.4 模式生物构巢曲霉 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题的研究内容、思路及方法 | 第20-22页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.2 研究思路 | 第21页 |
| 1.5.3 研究方法 | 第21-22页 |
| 第二章 构巢曲霉ΔsalA、ΔvnxA的菌株构建及鉴定 | 第22-34页 |
| 2.1 salA、vnxA功能基因的信息学分析 | 第23-24页 |
| 2.1.1 材料与方法 | 第23页 |
| 2.1.2 实验结果 | 第23-24页 |
| 2.2 ΔsalA、ΔvnxA的菌株构建 | 第24-34页 |
| 2.2.1 材料与方法 | 第24-30页 |
| 2.2.2 实验结果 | 第30-34页 |
| 第三章 ΔsalA、ΔvnxA菌株的表型测试 | 第34-40页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 3.1.1 菌种与培养条件 | 第34页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第34页 |
| 3.1.3 构巢曲霉菌丝生长和无性产孢的测试方法 | 第34-35页 |
| 3.1.4 固体平板稀释法测定基因缺失菌株对各种药物的敏感性 | 第35页 |
| 3.2 实验结果 | 第35-39页 |
| 3.2.1 salA缺失菌对构巢曲霉生长发育的影响 | 第35-37页 |
| 3.2.1.1 salA缺失菌与野生型在应对相同逆境无明显区别 | 第35-36页 |
| 3.2.1.2 salA缺失菌对细胞壁破坏试剂和抗真菌药物的测试 | 第36-37页 |
| 3.2.2 vnxA缺失菌对构巢曲霉生长发育的影响 | 第37-39页 |
| 3.2.2.1 ΔvnxA菌株在盐逆境及低钙环境下的表型测试 | 第37-38页 |
| 3.2.2.2 ΔvnxA菌株对细胞壁破坏试剂及抗真菌药物的表型测试 | 第38-39页 |
| 3.3 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 构巢曲霉akrA基因的表型测试和蛋白定位 | 第40-50页 |
| 4.1 材料与方法 | 第40-42页 |
| 4.1.1 akrA缺失菌株、酒精启动子菌株alcA(p)::GFP-akrA的构建 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂与仪器 | 第40页 |
| 4.1.3 E-test法测试ΔakrA菌株对于药物的敏感性 | 第40-41页 |
| 4.1.4 菌丝液体培养及观察 | 第41页 |
| 4.1.5 alcA(p)::GFP-akrA菌株的显微镜观察 | 第41-42页 |
| 4.2 实验结果 | 第42-48页 |
| 4.2.1 库蚊属NFAT在构巢曲霉中的同源蛋白 | 第42页 |
| 4.2.2 akrA基因的蛋白序列分析 | 第42-43页 |
| 4.2.3 akrA基因的缺失对构巢曲霉菌在逆境下的生长影响 | 第43-47页 |
| 4.2.3.1 akrA基因的缺失对构巢曲霉低钙环境下菌丝生长的影响 | 第43-44页 |
| 4.2.3.2 akrA基因缺失菌对金属阳离子敏感 | 第44-45页 |
| 4.2.3.3 akrA基因缺失菌对细胞壁破坏试剂的微弱耐受性 | 第45页 |
| 4.2.3.4 akrA基因缺失菌对唑类药物的敏感性 | 第45-47页 |
| 4.2.4 Akr蛋白的胞内定位 | 第47-48页 |
| 4.3 讨论 | 第48-50页 |
| 4.3.1 外源钙离子能够恢复akrA基因缺失造成的菌丝生长缺陷 | 第49页 |
| 4.3.2 akrA基因缺失菌对各种逆境的表型特征 | 第49页 |
| 4.3.3 Akr蛋白定位于高尔基体 | 第49-50页 |
| 第五章 akrA与钙调磷酸酶Calcineurin以及HACS系统成员cchA、midA的相互作用关系 | 第50-55页 |
| 5.1. 材料与方法 | 第50-52页 |
| 5.1.1 菌株及培养条件 | 第50-51页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第51页 |
| 5.1.3 ΔakrA/ΔcchA、ΔakrA/ΔmidA、ΔakrA/alc:cchA菌株的构建 | 第51页 |
| 5.1.3.1 菌株的有性杂交 | 第51页 |
| 5.1.4 钙信号相关基因缺失菌在各种逆境下的固体培养 | 第51-52页 |
| 5.2. 实验结果 | 第52-54页 |
| 5.2.1 ΔakrA/ΔcnaA等菌株应对细胞壁破坏试剂的逆境响应 | 第52-53页 |
| 5.2.2 ΔakrA/ΔcchA、ΔakrA/ΔmidA等菌株低钙环境下的菌丝生长 | 第53页 |
| 5.2.3 ΔakrA、OE:cchA、ΔakrA/OE:cchA菌株低钙环境下的菌丝生长 | 第53-54页 |
| 5.3. 讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 akrA、midA、cchA参与构巢曲霉应对外钙刺激下胞内钙离子浓度的瞬时响应 | 第55-62页 |
| 6.1. 材料与方法 | 第55-59页 |
| 6.1.1 菌株、质粒 | 第56-57页 |
| 6.1.2 试剂与仪器 | 第57页 |
| 6.1.3 表达Aequorin蛋白的各功能菌株的构建 | 第57-58页 |
| 6.1.4 实验菌株胞内自由钙离子浓度[Ca~(2+)]c的测定 | 第58-59页 |
| 6.2. 实验结果 | 第59-61页 |
| 6.2.1 外钙刺激下,akrA基因的缺失影响了胞外钙离子的流入 | 第59-60页 |
| 6.2.2 外钙刺激下,ΔmidA、ΔcchA菌株呈现出较低的钙离子摄入量 | 第60-61页 |
| 6.3. 讨论 | 第61-62页 |
| 第七章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录A | 第71-73页 |
| 附录B | 第73-74页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
